华中医学杂志
華中醫學雜誌
화중의학잡지
CENTRAL CHINA MEDICAL JOURNAL
2006年
3期
191-192,194
,共3页
郭东生%易伟%薛德麟%雷霆
郭東生%易偉%薛德麟%雷霆
곽동생%역위%설덕린%뢰정
LRIG1%表达载体%胞外段%胞内段%质粒构建
LRIG1%錶達載體%胞外段%胞內段%質粒構建
LRIG1%표체재체%포외단%포내단%질립구건
目的构建含LRIG1胞外段+跨膜段(ET)及跨膜段+胞内段(TC)基因的真核表达载体, 并研究它们的亚细胞定位.方法以人LRIG1全长的质粒p3XFLAG-CMV-9-LRIG1为模板, PCR扩增出3XFLAG-LRIG1-ET和LRIG1-TC, 并将之分别亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP-N1和p3XFLAG-CMV-9中. 酶切和DNA测序鉴定, 脂质体法将构建的质粒转染U251细胞, 观察标记基因荧光蛋白EGFP的表达, 间接免疫荧光检测标记基因3XFLAG的表达. 结果构建的质粒序列正确, 转染细胞后可检测到EGFP和3XFLAG基因的表达; LRIG1-ET和LRIG1-TC均主要表达在U251的胞膜上, 少量表达在胞浆. 结论包含LRIG1亚单位ET和TC的真核表达载体均构建成功, 其表达产物均主要位于胞膜, 少量位于胞浆.
目的構建含LRIG1胞外段+跨膜段(ET)及跨膜段+胞內段(TC)基因的真覈錶達載體, 併研究它們的亞細胞定位.方法以人LRIG1全長的質粒p3XFLAG-CMV-9-LRIG1為模闆, PCR擴增齣3XFLAG-LRIG1-ET和LRIG1-TC, 併將之分彆亞剋隆入真覈錶達載體pIRES2-EGFP-N1和p3XFLAG-CMV-9中. 酶切和DNA測序鑒定, 脂質體法將構建的質粒轉染U251細胞, 觀察標記基因熒光蛋白EGFP的錶達, 間接免疫熒光檢測標記基因3XFLAG的錶達. 結果構建的質粒序列正確, 轉染細胞後可檢測到EGFP和3XFLAG基因的錶達; LRIG1-ET和LRIG1-TC均主要錶達在U251的胞膜上, 少量錶達在胞漿. 結論包含LRIG1亞單位ET和TC的真覈錶達載體均構建成功, 其錶達產物均主要位于胞膜, 少量位于胞漿.
목적구건함LRIG1포외단+과막단(ET)급과막단+포내단(TC)기인적진핵표체재체, 병연구타문적아세포정위.방법이인LRIG1전장적질립p3XFLAG-CMV-9-LRIG1위모판, PCR확증출3XFLAG-LRIG1-ET화LRIG1-TC, 병장지분별아극륭입진핵표체재체pIRES2-EGFP-N1화p3XFLAG-CMV-9중. 매절화DNA측서감정, 지질체법장구건적질립전염U251세포, 관찰표기기인형광단백EGFP적표체, 간접면역형광검측표기기인3XFLAG적표체. 결과구건적질립서렬정학, 전염세포후가검측도EGFP화3XFLAG기인적표체; LRIG1-ET화LRIG1-TC균주요표체재U251적포막상, 소량표체재포장. 결론포함LRIG1아단위ET화TC적진핵표체재체균구건성공, 기표체산물균주요위우포막, 소량위우포장.
