CAJ | 학술논문

目的:构建重组腺病毒Ad-siRNA-VEGF并观察其抑制人胃腺癌细胞(MGC-803)血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的效果.方法:①选择针对人VEGF mRNA的特异性siRNA靶序列,设计、合成其相应的双链DNA,插入pSUPER质粒,得到psiRNA-VEGF;NotⅠ和XhoⅠ双酶切psiRNA-VEGF得siRNA-VEGF表达片段;插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack,构建pAdTrack-siR-NA-VEGF,后者与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组后,酶切鉴定、293细胞包装、扩增,得到重组腺病毒Ad-siRNA-VEGF;②Ad-siRNA-vEGF转染MGC-803细胞96 h后,Real Time PCR检测细胞VEGF mRNA水平、ELISA测定细胞培养液上清VEGF蛋白浓度.结果:成功构建重组腺病毒Ad-siRNA-VEGF,293细胞包装1 d后观察到绿色荧光蛋白表达,氯化铯梯度离心纯化获得约3.6×108efu/ml滴度的重组腺病毒;Ad-siRNA-VEGF转染MGC-803细胞96 h后,其VEGF mRNA水平下降了67.1%,培养液上清VEGF蛋白浓度下降了72.5%(P＜0.01).结论:腺病毒介导的RNAi技术可显著抑制人胃腺癌细胞的VEGF表达,这为抗血管生成治疗肿瘤的进一步研究开辟了新的方向.
목적:구건중조선병독Ad-siRNA-VEGF병관찰기억제인위선암세포(MGC-803)혈관내피생장인자(vascular endothelial growth factor,VEGF)표체적효과.방법:①선택침대인VEGF mRNA적특이성siRNA파서렬,설계、합성기상응적쌍련DNA,삽입pSUPER질립,득도psiRNA-VEGF;NotⅠ화XhoⅠ쌍매절psiRNA-VEGF득siRNA-VEGF표체편단;삽입선병독천사질립pAdTrack,구건pAdTrack-siR-NA-VEGF,후자여골가질립pAdEasy-1재대장간균BJ5183중동원중조후,매절감정、293세포포장、확증,득도중조선병독Ad-siRNA-VEGF;②Ad-siRNA-vEGF전염MGC-803세포96 h후,Real Time PCR검측세포VEGF mRNA수평、ELISA측정세포배양액상청VEGF단백농도.결과:성공구건중조선병독Ad-siRNA-VEGF,293세포포장1 d후관찰도록색형광단백표체,록화색제도리심순화획득약3.6×108efu/ml적도적중조선병독;Ad-siRNA-VEGF전염MGC-803세포96 h후,기VEGF mRNA수평하강료67.1%,배양액상청VEGF단백농도하강료72.5%(P＜0.01).결론:선병독개도적RNAi기술가현저억제인위선암세포적VEGF표체,저위항혈관생성치료종류적진일보연구개벽료신적방향.