河北医药
河北醫藥
하북의약
HEBEI MEDICAL JOURNAL
2005年
11期
803-804
,共2页
曹阳%李冬田%尹冰楠%佟惠春
曹暘%李鼕田%尹冰楠%佟惠春
조양%리동전%윤빙남%동혜춘
重叠延伸聚合酶链式反应%腺病毒载体
重疊延伸聚閤酶鏈式反應%腺病毒載體
중첩연신취합매련식반응%선병독재체
目的建立一种新型PCR技术(重叠延伸PCR)并用于腺病毒早期基因E1A与内核蛋白体进入位点IRES(internal ribosome entry site)的直接连接,为构建复制型腺病毒载体作准备.方法以PcAE1A质粒与PIRES-EGFP质粒为模板,通过引物设计,使E1A基因3'端与IRES基因5'端具有相互重叠的一段序列,用该组引物行PCR分别扩增E1A基因与IRES基因,再以这两种PCR产物的混合物作为模板,进行重叠延伸PCR扩增E1A-IRES基因片段.结果经酶切及测序鉴定重叠延伸PCR方法成功构建了E1A-IRES基因片段.结论重叠延伸PCR法能将任意两段DNA序列连接起来,其在分子生物学的领域中具有潜在应用价值.
目的建立一種新型PCR技術(重疊延伸PCR)併用于腺病毒早期基因E1A與內覈蛋白體進入位點IRES(internal ribosome entry site)的直接連接,為構建複製型腺病毒載體作準備.方法以PcAE1A質粒與PIRES-EGFP質粒為模闆,通過引物設計,使E1A基因3'耑與IRES基因5'耑具有相互重疊的一段序列,用該組引物行PCR分彆擴增E1A基因與IRES基因,再以這兩種PCR產物的混閤物作為模闆,進行重疊延伸PCR擴增E1A-IRES基因片段.結果經酶切及測序鑒定重疊延伸PCR方法成功構建瞭E1A-IRES基因片段.結論重疊延伸PCR法能將任意兩段DNA序列連接起來,其在分子生物學的領域中具有潛在應用價值.
목적건립일충신형PCR기술(중첩연신PCR)병용우선병독조기기인E1A여내핵단백체진입위점IRES(internal ribosome entry site)적직접련접,위구건복제형선병독재체작준비.방법이PcAE1A질립여PIRES-EGFP질립위모판,통과인물설계,사E1A기인3'단여IRES기인5'단구유상호중첩적일단서렬,용해조인물행PCR분별확증E1A기인여IRES기인,재이저량충PCR산물적혼합물작위모판,진행중첩연신PCR확증E1A-IRES기인편단.결과경매절급측서감정중첩연신PCR방법성공구건료E1A-IRES기인편단.결론중첩연신PCR법능장임의량단DNA서렬련접기래,기재분자생물학적영역중구유잠재응용개치.
