湖北大学学报（自然科学版）
湖北大學學報（自然科學版）
호북대학학보（자연과학판）
2005年
3期
272-274,279
,共4页
寡聚-1%6-葡萄糖苷酶%枯草芽孢杆菌%毕赤酵母%基因表达
寡聚-1%6-葡萄糖苷酶%枯草芽孢桿菌%畢赤酵母%基因錶達
과취-1%6-포도당감매%고초아포간균%필적효모%기인표체
根据枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因序列设计引物,以pHBM003为模板,扩增得到寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因,克隆至毕氏酵母(Pichia pastoris)表达载体pHBM905上,获得重组毕氏酵母表达载体pHBM9053.将此质粒分别转化毕氏酵母GS115、KM71和SMD1168菌株,筛选获得重组毕赤酵母GS115(pHBM9053)、KM71(pHBM9053)和SMD1168(pHBM9053);然后进行摇瓶诱导培养,这3株毕氏酵母分别在诱导培养60 h、48 h和24 h后,酶活力达到最高,对应为2.233 u/mL、0.34 u/mL和1.235 u/mL;GS115(pHBM9053)所产寡聚-1,6-葡萄糖苷酶的最适反应温度为75 ℃,最适反应pH值为6,在30～75 ℃、pH 8～9范围内较稳定.
根據枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因序列設計引物,以pHBM003為模闆,擴增得到寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因,剋隆至畢氏酵母(Pichia pastoris)錶達載體pHBM905上,穫得重組畢氏酵母錶達載體pHBM9053.將此質粒分彆轉化畢氏酵母GS115、KM71和SMD1168菌株,篩選穫得重組畢赤酵母GS115(pHBM9053)、KM71(pHBM9053)和SMD1168(pHBM9053);然後進行搖瓶誘導培養,這3株畢氏酵母分彆在誘導培養60 h、48 h和24 h後,酶活力達到最高,對應為2.233 u/mL、0.34 u/mL和1.235 u/mL;GS115(pHBM9053)所產寡聚-1,6-葡萄糖苷酶的最適反應溫度為75 ℃,最適反應pH值為6,在30～75 ℃、pH 8～9範圍內較穩定.
근거고초아포간균(Bacillus subtilis)과취-1,6-포도당감매기인서렬설계인물,이pHBM003위모판,확증득도과취-1,6-포도당감매기인,극륭지필씨효모(Pichia pastoris)표체재체pHBM905상,획득중조필씨효모표체재체pHBM9053.장차질립분별전화필씨효모GS115、KM71화SMD1168균주,사선획득중조필적효모GS115(pHBM9053)、KM71(pHBM9053)화SMD1168(pHBM9053);연후진행요병유도배양,저3주필씨효모분별재유도배양60 h、48 h화24 h후,매활력체도최고,대응위2.233 u/mL、0.34 u/mL화1.235 u/mL;GS115(pHBM9053)소산과취-1,6-포도당감매적최괄반응온도위75 ℃,최괄반응pH치위6,재30～75 ℃、pH 8～9범위내교은정.
