海洋与湖沼
海洋與湖沼
해양여호소
OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA
2005年
3期
221-225
,共5页
超低温冷冻保存%真鲷精子%DNA损伤%单细胞凝胶电泳
超低溫冷凍保存%真鯛精子%DNA損傷%單細胞凝膠電泳
초저온냉동보존%진조정자%DNA손상%단세포응효전영
应用单细胞凝胶电泳(SCGE)方法,对超低温冷冻保存的真鲷精子DNA的损伤状况进行了检测研究.针对研究对象,在实验过程中对传统的碱性单细胞凝胶电泳在铺胶方法、电泳条件等进行了改进.对精子细胞进行预处理,在碱性电泳液中使核DNA双链解链变性后电泳,EB染色10min后,在荧光显微镜下观察,每次随机观察50个左右的核DNA.结果表明,对荧光显微镜下观察到的精子核按彗尾长度及荧光强度划分等级,出现损伤的精子核DNA的损伤程度主要为轻度损伤和中度损伤,很少见有完全损伤的真鲷精子核.对比真鲷冷冻精液与新鲜精液的精子DNA的损伤状况,表明仅用30% DMSO冷冻精子DNA损伤状况与鲜精差异显著(P＞95%),其他冷冻方法保存的精子与鲜精差异不显著(P＞95%).
應用單細胞凝膠電泳(SCGE)方法,對超低溫冷凍保存的真鯛精子DNA的損傷狀況進行瞭檢測研究.針對研究對象,在實驗過程中對傳統的堿性單細胞凝膠電泳在鋪膠方法、電泳條件等進行瞭改進.對精子細胞進行預處理,在堿性電泳液中使覈DNA雙鏈解鏈變性後電泳,EB染色10min後,在熒光顯微鏡下觀察,每次隨機觀察50箇左右的覈DNA.結果錶明,對熒光顯微鏡下觀察到的精子覈按彗尾長度及熒光彊度劃分等級,齣現損傷的精子覈DNA的損傷程度主要為輕度損傷和中度損傷,很少見有完全損傷的真鯛精子覈.對比真鯛冷凍精液與新鮮精液的精子DNA的損傷狀況,錶明僅用30% DMSO冷凍精子DNA損傷狀況與鮮精差異顯著(P＞95%),其他冷凍方法保存的精子與鮮精差異不顯著(P＞95%).
응용단세포응효전영(SCGE)방법,대초저온냉동보존적진조정자DNA적손상상황진행료검측연구.침대연구대상,재실험과정중대전통적감성단세포응효전영재포효방법、전영조건등진행료개진.대정자세포진행예처리,재감성전영액중사핵DNA쌍련해련변성후전영,EB염색10min후,재형광현미경하관찰,매차수궤관찰50개좌우적핵DNA.결과표명,대형광현미경하관찰도적정자핵안혜미장도급형광강도화분등급,출현손상적정자핵DNA적손상정도주요위경도손상화중도손상,흔소견유완전손상적진조정자핵.대비진조냉동정액여신선정액적정자DNA적손상상황,표명부용30% DMSO냉동정자DNA손상상황여선정차이현저(P＞95%),기타냉동방법보존적정자여선정차이불현저(P＞95%).
