科学通报
科學通報
과학통보
CHINESE SCIENCE BULLETIN
2003年
10期
1059-1063
,共5页
猪瘟病毒%全长cDNA克隆%感染性RNA%转染%体外转录
豬瘟病毒%全長cDNA剋隆%感染性RNA%轉染%體外轉錄
저온병독%전장cDNA극륭%감염성RNA%전염%체외전록
通过RT-PCR获得猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)强毒株cF114株(中国标准强毒F114株经PK-15细胞增殖)全长基因组cDNA并测序. 与已知其他几株CSFV代表毒株F114, Brescia, Alfort和C株的核苷酸同源性分别为99.41%, 96.80%, 86.03%和95.70%; 氨基酸同源性分别为99.28%, 98.54%, 93.33%和97.41%. 将获得的各基因片段按病毒基因组顺序连接成全长cDNA, 插入pMC18质粒SalⅠ/ XbaⅠ之间, 得到含病毒全长基因组的重组质粒pMC12297. 用T7 RNA聚合酶进行体外转录, 转录出的RNA转染PK-15细胞, 细胞上清液经扩增后, 测定上清液中病毒滴度. 质粒来源的CSFV(vM12297)在抗原反应性和复制能力方面与父代病毒相似. 将疫苗毒C株囊膜蛋白基因E01和E2分别替换到pMC12297相应位置, 获得嵌合体基因组质粒pM/CE01和pM/CE2, 体外恢复获得嵌合体病毒vM/CE01和vM/CE2. 两种嵌合体病毒均能感染PK-15, SK-6和原代猪睾丸细胞, 间接免疫荧光检测显示较vM12297弱, 在PK-15细胞上滴度达到8×105 F-PFU/mL. 这一工作为进一步研究和探讨CSFV增殖与致弱的机理提供了重要的实验和理论资料.
通過RT-PCR穫得豬瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)彊毒株cF114株(中國標準彊毒F114株經PK-15細胞增殖)全長基因組cDNA併測序. 與已知其他幾株CSFV代錶毒株F114, Brescia, Alfort和C株的覈苷痠同源性分彆為99.41%, 96.80%, 86.03%和95.70%; 氨基痠同源性分彆為99.28%, 98.54%, 93.33%和97.41%. 將穫得的各基因片段按病毒基因組順序連接成全長cDNA, 插入pMC18質粒SalⅠ/ XbaⅠ之間, 得到含病毒全長基因組的重組質粒pMC12297. 用T7 RNA聚閤酶進行體外轉錄, 轉錄齣的RNA轉染PK-15細胞, 細胞上清液經擴增後, 測定上清液中病毒滴度. 質粒來源的CSFV(vM12297)在抗原反應性和複製能力方麵與父代病毒相似. 將疫苗毒C株囊膜蛋白基因E01和E2分彆替換到pMC12297相應位置, 穫得嵌閤體基因組質粒pM/CE01和pM/CE2, 體外恢複穫得嵌閤體病毒vM/CE01和vM/CE2. 兩種嵌閤體病毒均能感染PK-15, SK-6和原代豬睪汍細胞, 間接免疫熒光檢測顯示較vM12297弱, 在PK-15細胞上滴度達到8×105 F-PFU/mL. 這一工作為進一步研究和探討CSFV增殖與緻弱的機理提供瞭重要的實驗和理論資料.
통과RT-PCR획득저온병독(classical swine fever virus, CSFV)강독주cF114주(중국표준강독F114주경PK-15세포증식)전장기인조cDNA병측서. 여이지기타궤주CSFV대표독주F114, Brescia, Alfort화C주적핵감산동원성분별위99.41%, 96.80%, 86.03%화95.70%; 안기산동원성분별위99.28%, 98.54%, 93.33%화97.41%. 장획득적각기인편단안병독기인조순서련접성전장cDNA, 삽입pMC18질립SalⅠ/ XbaⅠ지간, 득도함병독전장기인조적중조질립pMC12297. 용T7 RNA취합매진행체외전록, 전록출적RNA전염PK-15세포, 세포상청액경확증후, 측정상청액중병독적도. 질립래원적CSFV(vM12297)재항원반응성화복제능력방면여부대병독상사. 장역묘독C주낭막단백기인E01화E2분별체환도pMC12297상응위치, 획득감합체기인조질립pM/CE01화pM/CE2, 체외회복획득감합체병독vM/CE01화vM/CE2. 량충감합체병독균능감염PK-15, SK-6화원대저고환세포, 간접면역형광검측현시교vM12297약, 재PK-15세포상적도체도8×105 F-PFU/mL. 저일공작위진일보연구화탐토CSFV증식여치약적궤리제공료중요적실험화이론자료.
