南京师大学报(自然科学版)
南京師大學報(自然科學版)
남경사대학보(자연과학판)
JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2001年
4期
82-87
,共6页
胡晓日文%孙晓文%李喜文%刘丽
鬍曉日文%孫曉文%李喜文%劉麗
호효일문%손효문%리희문%류려
抑制性差减杂交%重力环境%基因克隆
抑製性差減雜交%重力環境%基因剋隆
억제성차감잡교%중력배경%기인극륭
采用抑制性差减杂交方法,分别从经重力环境改变适应性锻炼(实验组)和未经重力环境改变适应性锻炼(驱动组)的两组SD大鼠的淋巴细胞中分别提取RNA和mRNA,并经逆转录酶合成dscDNA,经Rsa Ⅰ酶切后将实验组cDNA分为2组,分别与两种不同的接头衔接,再与驱动组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增.随机挑选80个克隆,通过斑点杂交,初步筛选出20个阳性克隆.
採用抑製性差減雜交方法,分彆從經重力環境改變適應性鍛煉(實驗組)和未經重力環境改變適應性鍛煉(驅動組)的兩組SD大鼠的淋巴細胞中分彆提取RNA和mRNA,併經逆轉錄酶閤成dscDNA,經Rsa Ⅰ酶切後將實驗組cDNA分為2組,分彆與兩種不同的接頭銜接,再與驅動組cDNA進行2次消減雜交及2次抑製性PCR,將產物與T/A載體連接構建cDNA消減文庫,併轉染大腸桿菌進行文庫擴增.隨機挑選80箇剋隆,通過斑點雜交,初步篩選齣20箇暘性剋隆.
채용억제성차감잡교방법,분별종경중력배경개변괄응성단련(실험조)화미경중력배경개변괄응성단련(구동조)적량조SD대서적림파세포중분별제취RNA화mRNA,병경역전록매합성dscDNA,경Rsa Ⅰ매절후장실험조cDNA분위2조,분별여량충불동적접두함접,재여구동조cDNA진행2차소감잡교급2차억제성PCR,장산물여T/A재체련접구건cDNA소감문고,병전염대장간균진행문고확증.수궤도선80개극륭,통과반점잡교,초보사선출20개양성극륭.
