CAJ | 학술논문

通过使用枯草芽胞杆菌一个蔗糖敏感sacB基因发展了一种依靠蔗糖的负向筛选系统,这种方法允许没有标记突变的基因进入胸膜肺炎放线杆菌染色体.首先,构建了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅡ基因GFP插入失活型的重组质粒pOSAKCG,其中一个表达盒含有氨苄青霉素基因和以外膜蛋白omlA作为启动子表达sacB基因.重组质粒pOSAKCG通过电穿孔转化,它的突变apxIICA基因与野生型亲本菌株胸膜肺炎放线杆菌HB03染色体上野生型apxIICA基因发生同源交换,两步法筛选获得了apxⅡ基因突变株HBC-/GFP+,PCR和Southem blot对突变株进行初步鉴定,进一步对突变株的一些生物学特性,包括它的溶血活性、免疫原性、生长特性及其对小鼠的安全性进行了研究.结果表明,无药物抗性标记突变株的构建是成功的.该突变株的构建为进一步研究突变株作为载体和疫苗奠定了坚实的基础.
통과사용고초아포간균일개자당민감sacB기인발전료일충의고자당적부향사선계통,저충방법윤허몰유표기돌변적기인진입흉막폐염방선간균염색체.수선,구건료저전염성흉막폐염방선간균독소apxⅡ기인GFP삽입실활형적중조질립pOSAKCG,기중일개표체합함유안변청매소기인화이외막단백omlA작위계동자표체sacB기인.중조질립pOSAKCG통과전천공전화,타적돌변apxIICA기인여야생형친본균주흉막폐염방선간균HB03염색체상야생형apxIICA기인발생동원교환,량보법사선획득료apxⅡ기인돌변주HBC-/GFP+,PCR화Southem blot대돌변주진행초보감정,진일보대돌변주적일사생물학특성,포괄타적용혈활성、면역원성、생장특성급기대소서적안전성진행료연구.결과표명,무약물항성표기돌변주적구건시성공적.해돌변주적구건위진일보연구돌변주작위재체화역묘전정료견실적기출.