生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2002年
3期
313-317
,共5页
秦跟基%陈佩度%刘耀光%方玉达%刘大钧
秦跟基%陳珮度%劉耀光%方玉達%劉大鈞
진근기%진패도%류요광%방옥체%류대균
小麦-簇毛麦易位系%小麦基因组TAC文库%克隆池PCR筛选%抗病候选基因
小麥-簇毛麥易位繫%小麥基因組TAC文庫%剋隆池PCR篩選%抗病候選基因
소맥-족모맥역위계%소맥기인조TAC문고%극륭지PCR사선%항병후선기인
用根据抗病基因保守区设计的一对简并性引物,从小麦-簇毛麦易位系6VS/6AL cDNA中PCR扩增获得一个具有抗病基因核苷酸结合位点( Nucleotide binding site, NBS)结构特点的DNA片段克隆N7.从小麦-簇毛麦易位系6vS/6AL基因组TAC(Transformation-competent artificial chromosome, TAC)文库的22块96孔板提取所有2112个克隆池(每个池含约1000个克隆)的质粒,再根据N7的核苷酸序列设计一对特异引物,用克隆池PCR(pooled PCR)法经分级筛选从文库中获得一个阳性克隆.以N7为探针,通过Southem杂交证实了该TAC克隆为真正含有抗病候选基因的克隆.研究结果表明克隆池PCR法对克隆数目巨大的基因组文库的筛选很有效.
用根據抗病基因保守區設計的一對簡併性引物,從小麥-簇毛麥易位繫6VS/6AL cDNA中PCR擴增穫得一箇具有抗病基因覈苷痠結閤位點( Nucleotide binding site, NBS)結構特點的DNA片段剋隆N7.從小麥-簇毛麥易位繫6vS/6AL基因組TAC(Transformation-competent artificial chromosome, TAC)文庫的22塊96孔闆提取所有2112箇剋隆池(每箇池含約1000箇剋隆)的質粒,再根據N7的覈苷痠序列設計一對特異引物,用剋隆池PCR(pooled PCR)法經分級篩選從文庫中穫得一箇暘性剋隆.以N7為探針,通過Southem雜交證實瞭該TAC剋隆為真正含有抗病候選基因的剋隆.研究結果錶明剋隆池PCR法對剋隆數目巨大的基因組文庫的篩選很有效.
용근거항병기인보수구설계적일대간병성인물,종소맥-족모맥역위계6VS/6AL cDNA중PCR확증획득일개구유항병기인핵감산결합위점( Nucleotide binding site, NBS)결구특점적DNA편단극륭N7.종소맥-족모맥역위계6vS/6AL기인조TAC(Transformation-competent artificial chromosome, TAC)문고적22괴96공판제취소유2112개극륭지(매개지함약1000개극륭)적질립,재근거N7적핵감산서렬설계일대특이인물,용극륭지PCR(pooled PCR)법경분급사선종문고중획득일개양성극륭.이N7위탐침,통과Southem잡교증실료해TAC극륭위진정함유항병후선기인적극륭.연구결과표명극륭지PCR법대극륭수목거대적기인조문고적사선흔유효.
