CAJ | 학술논문

以-35℃低温冷冻保存3个月的Vari-Fe-8mos和Fahru-Fe-9mos死亡牛胎儿皮肤上皮细胞,为核供体细胞,应用点击去核方法,和-300mmHg、2%CO2、8%～10%O2、38.5℃和100%湿度负压气相培养系统(负压组),进行了克隆牛试验研究,并与吸引和挤压及常压培养法进行了比较.结果表明,采用点击去核法对体外成熟培养18h、22h、24h的卵母细胞进行去核,去核成功率分别为90.0%、75.8%和55.6%,18h组显著高于22h组(P＜0.05),极显著高于24h组(P＜0.01);而且,点击去核法去核率为90.0%,极显著地高于吸引法的68.3%(P＜0.01),与挤压法去核率88.3%差异不显著;采用点击去核法囊胚发育率达34.1%,显著高于吸引法的18.0%(P＜0.05),与挤压法的20.9%差异不显著.负压组重构胚的卵裂率达70.0%,显著高于常压组的63.8%(P＜0.05),负压组囊胚发育率达35.8%,极显著高于常压组的23.2%(P＜0.01),负压组克隆囊胚细胞数为108±3.3个,极显著多于常压组的98±3.3(P＜0.01.将第6天的克隆桑椹胚和囊胚每2～3枚装入1支0.25ml塑料细管中,移植给同期发情处理的5头受体奶牛的黄体侧子宫角中,最终获得2头牛妊娠,并于2001年11月3日和11月6日产2头黑色雌性肉牛"康康"和"双双".通过微卫星DNA标记确认,克隆牛"康康"为来源于Vari-Fe-8mos牛胎儿皮肤上皮细胞,"双双"来源于Fahru-Fe-9mos牛胎儿皮肤上皮细胞的后代.试验结果表明,本研究所采用以-35℃低温冷冻保存3个月的牛胎儿皮肤细胞为核供体细胞,应用点击去核方法和负压气相培养系统制备克隆牛,具有一定的先进性和实用性.
이-35℃저온냉동보존3개월적Vari-Fe-8mos화Fahru-Fe-9mos사망우태인피부상피세포,위핵공체세포,응용점격거핵방법,화-300mmHg、2%CO2、8%～10%O2、38.5℃화100%습도부압기상배양계통(부압조),진행료극륭우시험연구,병여흡인화제압급상압배양법진행료비교.결과표명,채용점격거핵법대체외성숙배양18h、22h、24h적란모세포진행거핵,거핵성공솔분별위90.0%、75.8%화55.6%,18h조현저고우22h조(P＜0.05),겁현저고우24h조(P＜0.01);이차,점격거핵법거핵솔위90.0%,겁현저지고우흡인법적68.3%(P＜0.01),여제압법거핵솔88.3%차이불현저;채용점격거핵법낭배발육솔체34.1%,현저고우흡인법적18.0%(P＜0.05),여제압법적20.9%차이불현저.부압조중구배적란렬솔체70.0%,현저고우상압조적63.8%(P＜0.05),부압조낭배발육솔체35.8%,겁현저고우상압조적23.2%(P＜0.01),부압조극륭낭배세포수위108±3.3개,겁현저다우상압조적98±3.3(P＜0.01.장제6천적극륭상심배화낭배매2～3매장입1지0.25ml소료세관중,이식급동기발정처리적5두수체내우적황체측자궁각중,최종획득2두우임신,병우2001년11월3일화11월6일산2두흑색자성육우"강강"화"쌍쌍".통과미위성DNA표기학인,극륭우"강강"위래원우Vari-Fe-8mos우태인피부상피세포,"쌍쌍"래원우Fahru-Fe-9mos우태인피부상피세포적후대.시험결과표명,본연구소채용이-35℃저온냉동보존3개월적우태인피부세포위핵공체세포,응용점격거핵방법화부압기상배양계통제비극륭우,구유일정적선진성화실용성.