第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2006年
14期
1476-1478
,共3页
endostatin%硫氧还蛋白融合表达系统%融合蛋白
endostatin%硫氧還蛋白融閤錶達繫統%融閤蛋白
endostatin%류양환단백융합표체계통%융합단백
目的探索用硫氧还蛋白融合表达系统表达小鼠内皮抑素(endostatin)重组蛋白的最佳生产工艺路线.方法用pThioHis-endo重组质粒转化不同的大肠杆菌BL21、JM109、DH5α,经几种不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷(isopropylthio-galactoside,IPTG)诱导表达重组融合蛋白,或诱导表达不同时间后,采用SDS-PAGE分析表达产物;按所优化的条件进行重组内皮抑素的表达、包涵体的提取、洗涤、变性和复性,最后经Ni+柱纯化,再通过SDS-PAGE分析纯化的结果.结果3种大肠杆菌表达效果相差无几,最佳IPTG的浓度0.9 mmol/L,最佳诱导时间为5 h,经Ni+柱纯化后可获得可溶性的重组内皮抑素.结论利用本实验的优化条件可获得高产量、高纯度、可溶性的小鼠内皮抑素重组蛋白.
目的探索用硫氧還蛋白融閤錶達繫統錶達小鼠內皮抑素(endostatin)重組蛋白的最佳生產工藝路線.方法用pThioHis-endo重組質粒轉化不同的大腸桿菌BL21、JM109、DH5α,經幾種不同濃度的異丙基硫代半乳糖苷(isopropylthio-galactoside,IPTG)誘導錶達重組融閤蛋白,或誘導錶達不同時間後,採用SDS-PAGE分析錶達產物;按所優化的條件進行重組內皮抑素的錶達、包涵體的提取、洗滌、變性和複性,最後經Ni+柱純化,再通過SDS-PAGE分析純化的結果.結果3種大腸桿菌錶達效果相差無幾,最佳IPTG的濃度0.9 mmol/L,最佳誘導時間為5 h,經Ni+柱純化後可穫得可溶性的重組內皮抑素.結論利用本實驗的優化條件可穫得高產量、高純度、可溶性的小鼠內皮抑素重組蛋白.
목적탐색용류양환단백융합표체계통표체소서내피억소(endostatin)중조단백적최가생산공예로선.방법용pThioHis-endo중조질립전화불동적대장간균BL21、JM109、DH5α,경궤충불동농도적이병기류대반유당감(isopropylthio-galactoside,IPTG)유도표체중조융합단백,혹유도표체불동시간후,채용SDS-PAGE분석표체산물;안소우화적조건진행중조내피억소적표체、포함체적제취、세조、변성화복성,최후경Ni+주순화,재통과SDS-PAGE분석순화적결과.결과3충대장간균표체효과상차무궤,최가IPTG적농도0.9 mmol/L,최가유도시간위5 h,경Ni+주순화후가획득가용성적중조내피억소.결론이용본실험적우화조건가획득고산량、고순도、가용성적소서내피억소중조단백.
