医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2008年
1期
1-6
,共6页
赵晶%王玮%马雅婷%施慧莉%霍克克
趙晶%王瑋%馬雅婷%施慧莉%霍剋剋
조정%왕위%마아정%시혜리%곽극극
ZAKβ%YWHAZ%丝裂原活化蛋白激酶%磷酸化%细胞周期
ZAKβ%YWHAZ%絲裂原活化蛋白激酶%燐痠化%細胞週期
ZAKβ%YWHAZ%사렬원활화단백격매%린산화%세포주기
目的 研究ZAKβ与 YWHAZ蛋白之间的相互作用.方法 以ZAKβ为诱饵蛋白,利用酵母双杂交筛选人类肝脏cDNA文库,经GST Pull-down、免疫共沉淀和细胞共定位实验分别验证ZAKβ与猎物蛋白在体外和细胞内的相互作用,构建ZAKβ的截短体以确定相互作用的区域,用磷酸化抗体检测ZAKβ在相互作用中的磷酸化作用,并通过流式细胞仪检测这对蛋白相互作用对细胞周期的影响.结果 利用酵母双杂交筛选到一个能与ZAKβ相互作用的蛋白YWHAZ,并在体外和细胞内都验证了这二者的相互作用,发现这两个蛋白都能共定位于293 T细胞的胞质中,确定了ZAKβ的N端1～250氨基酸为与YWHAZ蛋白相互作用的区域.体外实验发现了这二者的相互作用涉及到磷酸化反应,发现这对蛋白的相互作用能提高293T细胞的G2期水平.结论 首次发现并证实了ZAKβ和 YWHAZ之间的相互作用,发现该相互作用涉及到磷酸化过程并能够对细胞周期产生影响.
目的 研究ZAKβ與 YWHAZ蛋白之間的相互作用.方法 以ZAKβ為誘餌蛋白,利用酵母雙雜交篩選人類肝髒cDNA文庫,經GST Pull-down、免疫共沉澱和細胞共定位實驗分彆驗證ZAKβ與獵物蛋白在體外和細胞內的相互作用,構建ZAKβ的截短體以確定相互作用的區域,用燐痠化抗體檢測ZAKβ在相互作用中的燐痠化作用,併通過流式細胞儀檢測這對蛋白相互作用對細胞週期的影響.結果 利用酵母雙雜交篩選到一箇能與ZAKβ相互作用的蛋白YWHAZ,併在體外和細胞內都驗證瞭這二者的相互作用,髮現這兩箇蛋白都能共定位于293 T細胞的胞質中,確定瞭ZAKβ的N耑1～250氨基痠為與YWHAZ蛋白相互作用的區域.體外實驗髮現瞭這二者的相互作用涉及到燐痠化反應,髮現這對蛋白的相互作用能提高293T細胞的G2期水平.結論 首次髮現併證實瞭ZAKβ和 YWHAZ之間的相互作用,髮現該相互作用涉及到燐痠化過程併能夠對細胞週期產生影響.
목적 연구ZAKβ여 YWHAZ단백지간적상호작용.방법 이ZAKβ위유이단백,이용효모쌍잡교사선인류간장cDNA문고,경GST Pull-down、면역공침정화세포공정위실험분별험증ZAKβ여작물단백재체외화세포내적상호작용,구건ZAKβ적절단체이학정상호작용적구역,용린산화항체검측ZAKβ재상호작용중적린산화작용,병통과류식세포의검측저대단백상호작용대세포주기적영향.결과 이용효모쌍잡교사선도일개능여ZAKβ상호작용적단백YWHAZ,병재체외화세포내도험증료저이자적상호작용,발현저량개단백도능공정위우293 T세포적포질중,학정료ZAKβ적N단1～250안기산위여YWHAZ단백상호작용적구역.체외실험발현료저이자적상호작용섭급도린산화반응,발현저대단백적상호작용능제고293T세포적G2기수평.결론 수차발현병증실료ZAKβ화 YWHAZ지간적상호작용,발현해상호작용섭급도린산화과정병능구대세포주기산생영향.
