郑州大学学报（医学版）
鄭州大學學報（醫學版）
정주대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2008年
5期
869-872
,共4页
李月白%张贵星%于雅丽%赵国强%王欢%董子明
李月白%張貴星%于雅麗%趙國彊%王歡%董子明
리월백%장귀성%우아려%조국강%왕환%동자명
DNA聚合酶%启动子%萤光素酶报告基因
DNA聚閤酶%啟動子%螢光素酶報告基因
DNA취합매%계동자%형광소매보고기인
目的:构建含人DNA聚合酶B(DNA polymerase beta,polβ)基因启动子的萤光素酶报告基因表达载体pGL3polβ/promoter.方法:利用PCR技术扩增人类polβ基因启动子的核心片段,克隆至含新霉素抗性的萤光素酶表达载体pGL3-Neo-enhancer,构建含DNA polβ启动子的萤光素酶表达载体pGLpolβ/promoter,重组子经双酶切、PCR及测序鉴定.将构建的载体用脂质体转染体外培养的食管癌EC-1细胞株,应用萤光素酶测定系统检测萤光素酶的表达活性.结果:测序结果表明,克隆获得的polβ基因启动子序列与GenBank报道的一致,且插入方向正确.pGL3polβ/promoter组萤光素酶的表达活性(2 207 348.000±71 626.763)与空白组(451.670±23.347)和pGL3.Neo-enhancer组(4 884.330±1 623.047)相比,差异有统计学意义(F=5 681.596,P<0.05).结论:成功构建了含人DNA polβ基因启动子的萤光素酶报告基因表达载体pGL3polβ/promoter.
目的:構建含人DNA聚閤酶B(DNA polymerase beta,polβ)基因啟動子的螢光素酶報告基因錶達載體pGL3polβ/promoter.方法:利用PCR技術擴增人類polβ基因啟動子的覈心片段,剋隆至含新黴素抗性的螢光素酶錶達載體pGL3-Neo-enhancer,構建含DNA polβ啟動子的螢光素酶錶達載體pGLpolβ/promoter,重組子經雙酶切、PCR及測序鑒定.將構建的載體用脂質體轉染體外培養的食管癌EC-1細胞株,應用螢光素酶測定繫統檢測螢光素酶的錶達活性.結果:測序結果錶明,剋隆穫得的polβ基因啟動子序列與GenBank報道的一緻,且插入方嚮正確.pGL3polβ/promoter組螢光素酶的錶達活性(2 207 348.000±71 626.763)與空白組(451.670±23.347)和pGL3.Neo-enhancer組(4 884.330±1 623.047)相比,差異有統計學意義(F=5 681.596,P<0.05).結論:成功構建瞭含人DNA polβ基因啟動子的螢光素酶報告基因錶達載體pGL3polβ/promoter.
목적:구건함인DNA취합매B(DNA polymerase beta,polβ)기인계동자적형광소매보고기인표체재체pGL3polβ/promoter.방법:이용PCR기술확증인류polβ기인계동자적핵심편단,극륭지함신매소항성적형광소매표체재체pGL3-Neo-enhancer,구건함DNA polβ계동자적형광소매표체재체pGLpolβ/promoter,중조자경쌍매절、PCR급측서감정.장구건적재체용지질체전염체외배양적식관암EC-1세포주,응용형광소매측정계통검측형광소매적표체활성.결과:측서결과표명,극륭획득적polβ기인계동자서렬여GenBank보도적일치,차삽입방향정학.pGL3polβ/promoter조형광소매적표체활성(2 207 348.000±71 626.763)여공백조(451.670±23.347)화pGL3.Neo-enhancer조(4 884.330±1 623.047)상비,차이유통계학의의(F=5 681.596,P<0.05).결론:성공구건료함인DNA polβ기인계동자적형광소매보고기인표체재체pGL3polβ/promoter.
