中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2009年
7期
63-67
,共5页
丁银巧%张文杰%张云霞%赵铁柱%孙明%遇秀玲%赵德明%田克恭
丁銀巧%張文傑%張雲霞%趙鐵柱%孫明%遇秀玲%趙德明%田剋恭
정은교%장문걸%장운하%조철주%손명%우수령%조덕명%전극공
Asia Ⅰ型口蹄疫病毒%VP1基因%杆状病毒%真核表达
Asia Ⅰ型口蹄疫病毒%VP1基因%桿狀病毒%真覈錶達
Asia Ⅰ형구제역병독%VP1기인%간상병독%진핵표체
利用杆状病毒表达系统对Asia Ⅰ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VPl基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究Asia Ⅰ型FMDV VP1蛋白功能及建立Asia Ⅰ型FMDV血清学诊断方法奠定基础.采用PCR方法从pGEM-T-Easy-Asia Ⅰ型VP1质粒中扩增VP1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFast-BaeHTA-VPl再转入DH10Bae感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Baemid-VPl,然后转染Sf9昆虫细胞.PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中,成功构建了杆状病毒重组质粒Baemid-VP1,SDS-PAGE和West-ern-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5 ku的VP1蛋白.将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化,通过ELISA分析,能特异性地检测出Asia Ⅰ型口蹄疫病毒阳性血清.Asia Ⅰ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为Asia Ⅰ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础.
利用桿狀病毒錶達繫統對Asia Ⅰ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VPl基因在Sf9昆蟲細胞中進行錶達,為研究Asia Ⅰ型FMDV VP1蛋白功能及建立Asia Ⅰ型FMDV血清學診斷方法奠定基礎.採用PCR方法從pGEM-T-Easy-Asia Ⅰ型VP1質粒中擴增VP1基因,將其插入桿狀病毒轉座載體pFastBacHTA,構建的重組質粒pFast-BaeHTA-VPl再轉入DH10Bae感受態細胞,經三重抗性與藍白斑篩選,穫得桿狀病毒重組質粒Baemid-VPl,然後轉染Sf9昆蟲細胞.PCR鑒定證實VP1基因正確地插入到Bacmid中,成功構建瞭桿狀病毒重組質粒Baemid-VP1,SDS-PAGE和West-ern-blotting檢測結果錶明,VP1基因在Sf9昆蟲細胞中錶達齣約26.5 ku的VP1蛋白.將可溶性錶達的融閤蛋白用Ni-NTA親和層析方法進行純化,通過ELISA分析,能特異性地檢測齣Asia Ⅰ型口蹄疫病毒暘性血清.Asia Ⅰ型FMDV VP1基因在桿狀病毒錶達繫統中的成功錶達為Asia Ⅰ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清學抗體水平檢測研究奠定瞭基礎.
이용간상병독표체계통대Asia Ⅰ형구제역병독(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VPl기인재Sf9곤충세포중진행표체,위연구Asia Ⅰ형FMDV VP1단백공능급건립Asia Ⅰ형FMDV혈청학진단방법전정기출.채용PCR방법종pGEM-T-Easy-Asia Ⅰ형VP1질립중확증VP1기인,장기삽입간상병독전좌재체pFastBacHTA,구건적중조질립pFast-BaeHTA-VPl재전입DH10Bae감수태세포,경삼중항성여람백반사선,획득간상병독중조질립Baemid-VPl,연후전염Sf9곤충세포.PCR감정증실VP1기인정학지삽입도Bacmid중,성공구건료간상병독중조질립Baemid-VP1,SDS-PAGE화West-ern-blotting검측결과표명,VP1기인재Sf9곤충세포중표체출약26.5 ku적VP1단백.장가용성표체적융합단백용Ni-NTA친화층석방법진행순화,통과ELISA분석,능특이성지검측출Asia Ⅰ형구제역병독양성혈청.Asia Ⅰ형FMDV VP1기인재간상병독표체계통중적성공표체위Asia Ⅰ형FMDV VP1단백적항원성급혈청학항체수평검측연구전정료기출.
