磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基p55PIK表达载体的构建及单克隆株的筛选
린지선기순3-격매조절아기p55PIK표체재체적구건급단극륭주적사선
Construction of p55PIK Expression Vector and Screening of Its Stable Cell Line
  • 万方数据
    华中科技大学学报(医学版) 화중과기대학학보(의학판)
    JOURNAL OF HUAZHONG UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(HEALTH SCIENCES)
    2010年 3期 366-368 ,共3页

    左学良%王桂华%蔡娟%邓豫%董硕%蔡少鑫%李小兰%陶德定%胡俊波

    좌학량%왕계화%채연%산예%동석%채소흠%리소란%도덕정%호준파

    磷脂酰肌醇3-激酶%p55PIK%基因表达%克隆细胞 燐脂酰肌醇3-激酶%p55PIK%基因錶達%剋隆細胞
    린지선기순3-격매%p55PIK%기인표체%극륭세포
    目的 构建表达载体pEGFP-N1-p55PIK,在人胚胎肾细胞株HEK293中筛选其稳定表达的细胞株.方法 PCR扩增p55PIK基因全长,经过Xho1和Xma1酶切、T4 DNA连接酶连接、DH5α转化,酶切和测序鉴定以确定构建质粒正确.转染人胚胎肾细胞株HEK293,G418筛选稳定表达p55PIK的单克隆细胞株,应用Western blot方法检测p55PIK蛋白的表达.结果 pEGFP-N1-p55PIK质粒经PCR、酶切、测序鉴定正确,经过G418筛选后获得稳定细胞株,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白在HEK293细胞中的表达,Western blot检测结果显示稳定转染pEGFP-N1-p55PIK的细胞中p55PIK表达水平增高.结论 正确构建表达载体pEGFP-N1-p55PIK,并在HEK293细胞中成功筛选出稳定表达p55PIK的细胞株,为进一步探讨p55PIK的功能提供了良好的工具.
    목적 구건표체재체pEGFP-N1-p55PIK,재인배태신세포주HEK293중사선기은정표체적세포주.방법 PCR확증p55PIK기인전장,경과Xho1화Xma1매절、T4 DNA련접매련접、DH5α전화,매절화측서감정이학정구건질립정학.전염인배태신세포주HEK293,G418사선은정표체p55PIK적단극륭세포주,응용Western blot방법검측p55PIK단백적표체.결과 pEGFP-N1-p55PIK질립경PCR、매절、측서감정정학,경과G418사선후획득은정세포주,재형광현미경하가관찰도록색형광단백재HEK293세포중적표체,Western blot검측결과현시은정전염pEGFP-N1-p55PIK적세포중p55PIK표체수평증고.결론 정학구건표체재체pEGFP-N1-p55PIK,병재HEK293세포중성공사선출은정표체p55PIK적세포주,위진일보탐토p55PIK적공능제공료량호적공구.
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