CAJ | 학술논문

背景与目的:p21是一种重要的细胞周期负性调控因子,目前对其在乳腺癌化疗过程中的作用尚不明确.本课题旨在观察将p21基因转染乳腺癌细胞后,对表柔比星敏感性的改变,以探讨新的表柔比星耐药可能的机制.方法:构建表达载体pEGFP-p21,采用脂质体转染法转入乳腺癌细胞株MCF-7中,筛选稳定表达p21的克隆;应用实时荧光定量PCR法检测转染组细胞中p21 mRNA的表达,流式细胞术和Hoechst33342荧光染色法分析细胞周期分布和凋亡变化;应用MTT法检测p21基因转染前后MCF-7细胞对表柔比星敏感性的变化,实时荧光定量PCR法(real-time fluorogent quantitative PCR,RFQ-PCR)观察survivin mRNA水平的变化.结果:pEGFP-p21载体转染MCF-7细胞后,MCF-7细胞中p21 mRNA的表达量明显增高,是空白对照组的155倍;转染后的细胞被阻滞于G0/G1期,但实验组与空白对照组相比,凋亡率改变的差异无统计学意义(P>0.05);表柔比星与p21基因转染联合作用时,p21可促进表柔比星对MCF-7细胞的杀伤作用,且细胞的抑制随作用时间的增加而增强,同时伴有survivin mRNA表达的降低,与表柔比星单独作用相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论:p21基因能增强MCF-7细胞对表柔比星的敏感性,其作用可能是通过使细胞周期发生G0/G1期阻滞及下调survivin的表达来实现的.
배경여목적:p21시일충중요적세포주기부성조공인자,목전대기재유선암화료과정중적작용상불명학.본과제지재관찰장p21기인전염유선암세포후,대표유비성민감성적개변,이탐토신적표유비성내약가능적궤제.방법:구건표체재체pEGFP-p21,채용지질체전염법전입유선암세포주MCF-7중,사선은정표체p21적극륭;응용실시형광정량PCR법검측전염조세포중p21 mRNA적표체,류식세포술화Hoechst33342형광염색법분석세포주기분포화조망변화;응용MTT법검측p21기인전염전후MCF-7세포대표유비성민감성적변화,실시형광정량PCR법(real-time fluorogent quantitative PCR,RFQ-PCR)관찰survivin mRNA수평적변화.결과:pEGFP-p21재체전염MCF-7세포후,MCF-7세포중p21 mRNA적표체량명현증고,시공백대조조적155배;전염후적세포피조체우G0/G1기,단실험조여공백대조조상비,조망솔개변적차이무통계학의의(P>0.05);표유비성여p21기인전염연합작용시,p21가촉진표유비성대MCF-7세포적살상작용,차세포적억제수작용시간적증가이증강,동시반유survivin mRNA표체적강저,여표유비성단독작용상비,차이유통계학의의(P<0.05).결론:p21기인능증강MCF-7세포대표유비성적민감성,기작용가능시통과사세포주기발생G0/G1기조체급하조survivin적표체래실현적.