生物学杂志
生物學雜誌
생물학잡지
JOURNAL OF BIOLOGY
2011年
2期
47-50
,共4页
谷胱甘肽-S-转移酶%载体构建%蛋白表达%Norhhem Blot
穀胱甘肽-S-轉移酶%載體構建%蛋白錶達%Norhhem Blot
곡광감태-S-전이매%재체구건%단백표체%Norhhem Blot
谷胱甘肽-S-转移酶(GST)是生物体内重要的解毒酶系之一.根据斜纹夜蛾(Spodotera litura)GST基因设计特异引物,从cDNA文库中扩增GST基因并克隆至pGEM-T栽体,经鉴定后经Spe I和EcoR I双酶切后,与表达载体pPROEX HTb连接.转化感受态细胞E.coli DH5a,经PCR鉴定和双酶切鉴定得到阳性重组质粒pPROEX HTbGST,在IPTG诱导下,获得融合蛋白的表达.经SDS-PAGE蛋白电泳鉴定,表达产物为25KD的GST融合蛋白.Northern杂交结果表明,2龄期斜纹夜蛾GST基因在mRNA水平上的表达量最大,3龄期次之,5龄期时的表达量最小.
穀胱甘肽-S-轉移酶(GST)是生物體內重要的解毒酶繫之一.根據斜紋夜蛾(Spodotera litura)GST基因設計特異引物,從cDNA文庫中擴增GST基因併剋隆至pGEM-T栽體,經鑒定後經Spe I和EcoR I雙酶切後,與錶達載體pPROEX HTb連接.轉化感受態細胞E.coli DH5a,經PCR鑒定和雙酶切鑒定得到暘性重組質粒pPROEX HTbGST,在IPTG誘導下,穫得融閤蛋白的錶達.經SDS-PAGE蛋白電泳鑒定,錶達產物為25KD的GST融閤蛋白.Northern雜交結果錶明,2齡期斜紋夜蛾GST基因在mRNA水平上的錶達量最大,3齡期次之,5齡期時的錶達量最小.
곡광감태-S-전이매(GST)시생물체내중요적해독매계지일.근거사문야아(Spodotera litura)GST기인설계특이인물,종cDNA문고중확증GST기인병극륭지pGEM-T재체,경감정후경Spe I화EcoR I쌍매절후,여표체재체pPROEX HTb련접.전화감수태세포E.coli DH5a,경PCR감정화쌍매절감정득도양성중조질립pPROEX HTbGST,재IPTG유도하,획득융합단백적표체.경SDS-PAGE단백전영감정,표체산물위25KD적GST융합단백.Northern잡교결과표명,2령기사문야아GST기인재mRNA수평상적표체량최대,3령기차지,5령기시적표체량최소.
