中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2012年
1期
11-13
,共3页
赵继学%王广义%张海玉%伏鑫
趙繼學%王廣義%張海玉%伏鑫
조계학%왕엄의%장해옥%복흠
骨髓间充质干细胞%细胞培养%鉴定%小鼠
骨髓間充質榦細胞%細胞培養%鑒定%小鼠
골수간충질간세포%세포배양%감정%소서
目的 探讨分离、培养、纯化和鉴定小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)方法,观察MSCs体外生长特征.方法 取小鼠胫骨和股骨,取出骨髓细胞,用1.073 g/ml的Percoll分离液梯度离心,培养皿培养、换液除去非贴壁细胞,获得MSCs,通过传代对MSCs进行纯化和扩增培养.进行形态学观察,测定生长曲线,用流式细胞仪检测P3代MSCs细胞周期及表面抗原.结果 新分离的MSCs呈小圆形,形态规整.培养传代后,细胞大小均匀,形态较一致,多为梭形.P1、P2、P3代MSCs生长曲线均呈S型.P3代MSCs 75.27%的细胞处于G0-G1期.P3代MSCs CD44表达阳性,表达率为88.71%,CD34表达阴性.结论 利用密度梯度离心法联合贴壁培养法分离纯化骨髓MSCs,在含15%FBS的DMEM-LG培养基中培养MSCs,可获得稳定生长的昆明小鼠MSCs.培养的MSCs细胞系性状稳定,表型稳定均一,适于做进一步研究.
目的 探討分離、培養、純化和鑒定小鼠骨髓間充質榦細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)方法,觀察MSCs體外生長特徵.方法 取小鼠脛骨和股骨,取齣骨髓細胞,用1.073 g/ml的Percoll分離液梯度離心,培養皿培養、換液除去非貼壁細胞,穫得MSCs,通過傳代對MSCs進行純化和擴增培養.進行形態學觀察,測定生長麯線,用流式細胞儀檢測P3代MSCs細胞週期及錶麵抗原.結果 新分離的MSCs呈小圓形,形態規整.培養傳代後,細胞大小均勻,形態較一緻,多為梭形.P1、P2、P3代MSCs生長麯線均呈S型.P3代MSCs 75.27%的細胞處于G0-G1期.P3代MSCs CD44錶達暘性,錶達率為88.71%,CD34錶達陰性.結論 利用密度梯度離心法聯閤貼壁培養法分離純化骨髓MSCs,在含15%FBS的DMEM-LG培養基中培養MSCs,可穫得穩定生長的昆明小鼠MSCs.培養的MSCs細胞繫性狀穩定,錶型穩定均一,適于做進一步研究.
목적 탐토분리、배양、순화화감정소서골수간충질간세포(mesenchymal stem cells,MSCs)방법,관찰MSCs체외생장특정.방법 취소서경골화고골,취출골수세포,용1.073 g/ml적Percoll분리액제도리심,배양명배양、환액제거비첩벽세포,획득MSCs,통과전대대MSCs진행순화화확증배양.진행형태학관찰,측정생장곡선,용류식세포의검측P3대MSCs세포주기급표면항원.결과 신분리적MSCs정소원형,형태규정.배양전대후,세포대소균균,형태교일치,다위사형.P1、P2、P3대MSCs생장곡선균정S형.P3대MSCs 75.27%적세포처우G0-G1기.P3대MSCs CD44표체양성,표체솔위88.71%,CD34표체음성.결론 이용밀도제도리심법연합첩벽배양법분리순화골수MSCs,재함15%FBS적DMEM-LG배양기중배양MSCs,가획득은정생장적곤명소서MSCs.배양적MSCs세포계성상은정,표형은정균일,괄우주진일보연구.
