中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2011年
12期
1081-1084
,共4页
NK4%慢病毒载体%人高侵袭转移肝癌细胞LM3%基因转染
NK4%慢病毒載體%人高侵襲轉移肝癌細胞LM3%基因轉染
NK4%만병독재체%인고침습전이간암세포LM3%기인전염
目的 构建共表达人NK4基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组慢病毒载体,转染人高侵袭转移肝癌细胞LM3(HCCLM3),观察其转染效率及表达情况.方法 采用DNA重组技术,将NK4基因克隆至带EGFP的慢病毒表达载体pLenti6.3-内部核糖体进入位点序列(IRES)-EGFP中,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带NK4基因的质粒pLemi6.3-NK4-IRES-EGFP共转染293T细胞,包装慢病毒并测定滴度.以不同感染复数(MOI)的重组慢病毒感染293T细胞,筛选最适MOI,以最适MOI重组慢病毒感染HCCLM3细胞,观察转染效率.Western blot法测定细胞中NK4蛋白表达水平.结果 成功构建共表达NK4基因和EGFP基因的慢病毒载体pLenti6.3 -NK4 -IRES-EGFP,并对其包装、纯化及浓缩后测定病毒滴度为1.08×108 TU/mL.重组慢病毒感染HCCLM3细胞筛选其最适MOI为7.转染后HCCLM3细胞中可见明显的NK4蛋白表达,而未转染细胞中无NK4蛋白的表达.结论 成功构建了NK4基因的重组慢病毒载体,有效地转染HCCLM3细胞后可高表达NK4蛋白.
目的 構建共錶達人NK4基因和增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)基因的重組慢病毒載體,轉染人高侵襲轉移肝癌細胞LM3(HCCLM3),觀察其轉染效率及錶達情況.方法 採用DNA重組技術,將NK4基因剋隆至帶EGFP的慢病毒錶達載體pLenti6.3-內部覈糖體進入位點序列(IRES)-EGFP中,併用脂質體介導法將慢病毒包裝繫統和帶NK4基因的質粒pLemi6.3-NK4-IRES-EGFP共轉染293T細胞,包裝慢病毒併測定滴度.以不同感染複數(MOI)的重組慢病毒感染293T細胞,篩選最適MOI,以最適MOI重組慢病毒感染HCCLM3細胞,觀察轉染效率.Western blot法測定細胞中NK4蛋白錶達水平.結果 成功構建共錶達NK4基因和EGFP基因的慢病毒載體pLenti6.3 -NK4 -IRES-EGFP,併對其包裝、純化及濃縮後測定病毒滴度為1.08×108 TU/mL.重組慢病毒感染HCCLM3細胞篩選其最適MOI為7.轉染後HCCLM3細胞中可見明顯的NK4蛋白錶達,而未轉染細胞中無NK4蛋白的錶達.結論 成功構建瞭NK4基因的重組慢病毒載體,有效地轉染HCCLM3細胞後可高錶達NK4蛋白.
목적 구건공표체인NK4기인화증강형록색형광단백(EGFP)기인적중조만병독재체,전염인고침습전이간암세포LM3(HCCLM3),관찰기전염효솔급표체정황.방법 채용DNA중조기술,장NK4기인극륭지대EGFP적만병독표체재체pLenti6.3-내부핵당체진입위점서렬(IRES)-EGFP중,병용지질체개도법장만병독포장계통화대NK4기인적질립pLemi6.3-NK4-IRES-EGFP공전염293T세포,포장만병독병측정적도.이불동감염복수(MOI)적중조만병독감염293T세포,사선최괄MOI,이최괄MOI중조만병독감염HCCLM3세포,관찰전염효솔.Western blot법측정세포중NK4단백표체수평.결과 성공구건공표체NK4기인화EGFP기인적만병독재체pLenti6.3 -NK4 -IRES-EGFP,병대기포장、순화급농축후측정병독적도위1.08×108 TU/mL.중조만병독감염HCCLM3세포사선기최괄MOI위7.전염후HCCLM3세포중가견명현적NK4단백표체,이미전염세포중무NK4단백적표체.결론 성공구건료NK4기인적중조만병독재체,유효지전염HCCLM3세포후가고표체NK4단백.
