南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2012年
1期
55-60
,共6页
杨飞华%龙北国%谭毅%龚雅%马伟峰
楊飛華%龍北國%譚毅%龔雅%馬偉峰
양비화%룡북국%담의%공아%마위봉
基质细胞衍生因子-1%CXCR4%拮抗剂%SDF- 1P2G54
基質細胞衍生因子-1%CXCR4%拮抗劑%SDF- 1P2G54
기질세포연생인자-1%CXCR4%길항제%SDF- 1P2G54
目的 对SDF-1进行遗传改造,将其第2位氨基酸由脯氨酸(P)突变为甘氨酸(G),且缺失其C-端α螺旋结构,以获得一种CXCR4特异性拮抗剂SDF- 1P2G54.方法 将PCR扩增的SDF-1突变体SDF-1p2g54的基因插入表达载体pET-30a(+),并转化BL21(DE3)菌株.IPTG诱导表达的重组蛋白SDF-1P2G54在变性条件下采用镍柱亲和层析纯化,并通过梯度稀释和超滤方法得以复性.利用趋化实验鉴定SDF-1P2G54对Jurkat细胞的趋化活性及对SDF-1趋化活性的抑制效应,流式细胞仪检测SDF-1P2G54诱导MOLT4细胞钙内流及细胞表面CXCR4内在化的能力.结果 SDF-1P2G54完全丧失激活CXCR4、趋化Jurkat细胞跨膜迁移和诱导MOLT4细胞钙内流的能力,却保持了与CXCR4的高亲和性,能有效抑制野生型SDF-1对Jurkat的趋化效应、诱导MOLT4细胞表面CXCR4的快速内在化.结论 SDF-1P2G54是一种新型的CXCR4特异性拮抗剂,具有开发成抑制HIV-1感染和癌细胞转移等重大疾病特效药物的潜在应用价值.
目的 對SDF-1進行遺傳改造,將其第2位氨基痠由脯氨痠(P)突變為甘氨痠(G),且缺失其C-耑α螺鏇結構,以穫得一種CXCR4特異性拮抗劑SDF- 1P2G54.方法 將PCR擴增的SDF-1突變體SDF-1p2g54的基因插入錶達載體pET-30a(+),併轉化BL21(DE3)菌株.IPTG誘導錶達的重組蛋白SDF-1P2G54在變性條件下採用鎳柱親和層析純化,併通過梯度稀釋和超濾方法得以複性.利用趨化實驗鑒定SDF-1P2G54對Jurkat細胞的趨化活性及對SDF-1趨化活性的抑製效應,流式細胞儀檢測SDF-1P2G54誘導MOLT4細胞鈣內流及細胞錶麵CXCR4內在化的能力.結果 SDF-1P2G54完全喪失激活CXCR4、趨化Jurkat細胞跨膜遷移和誘導MOLT4細胞鈣內流的能力,卻保持瞭與CXCR4的高親和性,能有效抑製野生型SDF-1對Jurkat的趨化效應、誘導MOLT4細胞錶麵CXCR4的快速內在化.結論 SDF-1P2G54是一種新型的CXCR4特異性拮抗劑,具有開髮成抑製HIV-1感染和癌細胞轉移等重大疾病特效藥物的潛在應用價值.
목적 대SDF-1진행유전개조,장기제2위안기산유포안산(P)돌변위감안산(G),차결실기C-단α라선결구,이획득일충CXCR4특이성길항제SDF- 1P2G54.방법 장PCR확증적SDF-1돌변체SDF-1p2g54적기인삽입표체재체pET-30a(+),병전화BL21(DE3)균주.IPTG유도표체적중조단백SDF-1P2G54재변성조건하채용얼주친화층석순화,병통과제도희석화초려방법득이복성.이용추화실험감정SDF-1P2G54대Jurkat세포적추화활성급대SDF-1추화활성적억제효응,류식세포의검측SDF-1P2G54유도MOLT4세포개내류급세포표면CXCR4내재화적능력.결과 SDF-1P2G54완전상실격활CXCR4、추화Jurkat세포과막천이화유도MOLT4세포개내류적능력,각보지료여CXCR4적고친화성,능유효억제야생형SDF-1대Jurkat적추화효응、유도MOLT4세포표면CXCR4적쾌속내재화.결론 SDF-1P2G54시일충신형적CXCR4특이성길항제,구유개발성억제HIV-1감염화암세포전이등중대질병특효약물적잠재응용개치.
