北方园艺
北方園藝
북방완예
NORTHERN HORTICULTURE
2012年
12期
113-116
,共4页
毛尖紫萼藓%抗旱%T-PCR%基因克隆%载体构建
毛尖紫萼蘚%抗旱%T-PCR%基因剋隆%載體構建
모첨자악선%항한%T-PCR%기인극륭%재체구건
利用PCR技术,以毛尖紫萼藓总RNA为模板,扩增出上、下游分别加入BamHⅠ、SacⅠ酶切位点的GH394(657 bp)基因CDS区全长序列,采用pMD18-T Vector、pRI 101-AN Vector 构建了该基因克隆、表达载体,并将重组载体质粒转化到大肠杆菌(Escherichia coli)DH 5α和根癌农杆菌(Agrobacterium tume faciens)工程菌株GV3101中,并选用X-gal、IPTG和利福平(Rifampicin,Rif)、卡那霉素(Kanamyein,Km)筛选阳性菌株.结果表明:已成功构建pMD-GH394克隆载体和pRI 101-AN-GH394表达载体并将重组质粒转入目的菌株中；该试验为后续实现毛尖紫萼藓GH394基因抗旱预期功能的验证,奠定了良好的试验基础.
利用PCR技術,以毛尖紫萼蘚總RNA為模闆,擴增齣上、下遊分彆加入BamHⅠ、SacⅠ酶切位點的GH394(657 bp)基因CDS區全長序列,採用pMD18-T Vector、pRI 101-AN Vector 構建瞭該基因剋隆、錶達載體,併將重組載體質粒轉化到大腸桿菌(Escherichia coli)DH 5α和根癌農桿菌(Agrobacterium tume faciens)工程菌株GV3101中,併選用X-gal、IPTG和利福平(Rifampicin,Rif)、卡那黴素(Kanamyein,Km)篩選暘性菌株.結果錶明:已成功構建pMD-GH394剋隆載體和pRI 101-AN-GH394錶達載體併將重組質粒轉入目的菌株中；該試驗為後續實現毛尖紫萼蘚GH394基因抗旱預期功能的驗證,奠定瞭良好的試驗基礎.
이용PCR기술,이모첨자악선총RNA위모판,확증출상、하유분별가입BamHⅠ、SacⅠ매절위점적GH394(657 bp)기인CDS구전장서렬,채용pMD18-T Vector、pRI 101-AN Vector 구건료해기인극륭、표체재체,병장중조재체질립전화도대장간균(Escherichia coli)DH 5α화근암농간균(Agrobacterium tume faciens)공정균주GV3101중,병선용X-gal、IPTG화리복평(Rifampicin,Rif)、잡나매소(Kanamyein,Km)사선양성균주.결과표명:이성공구건pMD-GH394극륭재체화pRI 101-AN-GH394표체재체병장중조질립전입목적균주중；해시험위후속실현모첨자악선GH394기인항한예기공능적험증,전정료량호적시험기출.
