检验医学
檢驗醫學
검험의학
LABORATORY MEDICINE
2004年
1期
36-39
,共4页
赵缜%李敏%彭奕冰%支立明%潘宁%季育华
趙縝%李敏%彭奕冰%支立明%潘寧%季育華
조진%리민%팽혁빙%지립명%반저%계육화
人巨细胞病毒pp65抗原血症%外周血多形核白细胞%荧光定量PCR
人巨細胞病毒pp65抗原血癥%外週血多形覈白細胞%熒光定量PCR
인거세포병독pp65항원혈증%외주혈다형핵백세포%형광정량PCR
目的建立人巨细胞病毒抗原pp65(HCMVpp65)血症特异、灵敏和低成本的酶免组化和荧光免疫组化方法,以利于临床推广应用.方法以HCMV-AD169感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)爬片作阳性对照,选择试剂和材料组建试剂盒,并与商品化的同类试剂盒作比较,建立人外周血多形核白细胞(PMNLs)中HCMVpp65抗原阳性细胞的检测方法,然后再用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法做相应考评.结果我们建立的HCMVpp65抗原血症检测法能成功地检出PMNLs中的pp65阳性细胞.其可检测限分别为102 pfu/ml的AD169攻击24 h后的HELF细胞爬片和3～5个pp65阳性细胞/2×105 PMNLs;用高相对分子质量(500 000)的葡聚糖能快速、有效地分离PMNLs;用4%中性多聚甲醛固定的细胞片,于-20 °C或以下可长期保存(≥6个月),而且pp65抗原性稳定.结论自建的试剂盒与同类进口试剂盒相比,检测pp65的结果差异无显著性,并与FQ-PCR的检测结果相一致,其检测特异、灵敏、操作简单、费用低廉,适宜临床实验室推广应用.
目的建立人巨細胞病毒抗原pp65(HCMVpp65)血癥特異、靈敏和低成本的酶免組化和熒光免疫組化方法,以利于臨床推廣應用.方法以HCMV-AD169感染的人胚肺成纖維細胞(HELF)爬片作暘性對照,選擇試劑和材料組建試劑盒,併與商品化的同類試劑盒作比較,建立人外週血多形覈白細胞(PMNLs)中HCMVpp65抗原暘性細胞的檢測方法,然後再用熒光定量PCR(FQ-PCR)方法做相應攷評.結果我們建立的HCMVpp65抗原血癥檢測法能成功地檢齣PMNLs中的pp65暘性細胞.其可檢測限分彆為102 pfu/ml的AD169攻擊24 h後的HELF細胞爬片和3～5箇pp65暘性細胞/2×105 PMNLs;用高相對分子質量(500 000)的葡聚糖能快速、有效地分離PMNLs;用4%中性多聚甲醛固定的細胞片,于-20 °C或以下可長期保存(≥6箇月),而且pp65抗原性穩定.結論自建的試劑盒與同類進口試劑盒相比,檢測pp65的結果差異無顯著性,併與FQ-PCR的檢測結果相一緻,其檢測特異、靈敏、操作簡單、費用低廉,適宜臨床實驗室推廣應用.
목적건립인거세포병독항원pp65(HCMVpp65)혈증특이、령민화저성본적매면조화화형광면역조화방법,이리우림상추엄응용.방법이HCMV-AD169감염적인배폐성섬유세포(HELF)파편작양성대조,선택시제화재료조건시제합,병여상품화적동류시제합작비교,건립인외주혈다형핵백세포(PMNLs)중HCMVpp65항원양성세포적검측방법,연후재용형광정량PCR(FQ-PCR)방법주상응고평.결과아문건립적HCMVpp65항원혈증검측법능성공지검출PMNLs중적pp65양성세포.기가검측한분별위102 pfu/ml적AD169공격24 h후적HELF세포파편화3～5개pp65양성세포/2×105 PMNLs;용고상대분자질량(500 000)적포취당능쾌속、유효지분리PMNLs;용4%중성다취갑철고정적세포편,우-20 °C혹이하가장기보존(≥6개월),이차pp65항원성은정.결론자건적시제합여동류진구시제합상비,검측pp65적결과차이무현저성,병여FQ-PCR적검측결과상일치,기검측특이、령민、조작간단、비용저렴,괄의림상실험실추엄응용.
