CAJ | 학술논문

[目的]探讨热休克因子1(heat shock factor 1,HSF1)对过氧化氢所致小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)损伤的影响.[方法]利用HSF1基因敲除(HSF1-/-)小鼠和转基因技术,通过稳定转染SV40大T抗原基因,建立缺失HSF1基因(HSF1-/-纯合子)和含有HSF1基因(HSF1+/+野生型)的永生化MEFs,并采用免疫印迹和基因组DNA PCR技术进行鉴定.向细胞培养基中加入终浓度为0.5 mmol/L的过氧化氢导致细胞损伤,采用甲苯胺兰染色和总蛋白合成能力分析方法来判定致细胞损伤程度(核仁的结构和功能改变).[结果]PCR产物电泳显示在各种基因型MEFs中均含有SV40大T抗原基因,在HSF1-/-MEFs中仅含有替代基因,在HSF1+/+MEFs中仅含HSF1基因,在HSF1-/+MEFs中则含有替代基因和HSF1基因;免疫印迹显示热休克反应(heat shock response,HSR)不能诱导HSF1-/-MEFs中HSP70表达.甲苯胺兰染色和总蛋白合成能力分析显示0.5 mmol/L过氧化氢可引起HSF1+/+MEFs及HSF1-/-MEFs核仁分离及蛋白质合成抑制,与正常对照组相比,P＜0.05;HSR能显著抑制过氧化氢所致HSF1+/+MEFs核仁分离及蛋白质合成抑制,与单纯过氧化氢损伤组相比,P＜0.05,但HSR对过氧化氢所致HSF1-/-MEFs核仁分离及蛋白质合成抑制没有影响,与单纯过氧化氢损伤组相比,P＞0.05.[结论]HSR以一种HSF1依赖方式显著抑制过氧化氢所致细胞核仁结构与功能损伤.
[목적]탐토열휴극인자1(heat shock factor 1,HSF1)대과양화경소치소서배태성섬유세포(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)손상적영향.[방법]이용HSF1기인고제(HSF1-/-)소서화전기인기술,통과은정전염SV40대T항원기인,건립결실HSF1기인(HSF1-/-순합자)화함유HSF1기인(HSF1+/+야생형)적영생화MEFs,병채용면역인적화기인조DNA PCR기술진행감정.향세포배양기중가입종농도위0.5 mmol/L적과양화경도치세포손상,채용갑분알란염색화총단백합성능력분석방법래판정치세포손상정도(핵인적결구화공능개변).[결과]PCR산물전영현시재각충기인형MEFs중균함유SV40대T항원기인,재HSF1-/-MEFs중부함유체대기인,재HSF1+/+MEFs중부함HSF1기인,재HSF1-/+MEFs중칙함유체대기인화HSF1기인;면역인적현시열휴극반응(heat shock response,HSR)불능유도HSF1-/-MEFs중HSP70표체.갑분알란염색화총단백합성능력분석현시0.5 mmol/L과양화경가인기HSF1+/+MEFs급HSF1-/-MEFs핵인분리급단백질합성억제,여정상대조조상비,P＜0.05;HSR능현저억제과양화경소치HSF1+/+MEFs핵인분리급단백질합성억제,여단순과양화경손상조상비,P＜0.05,단HSR대과양화경소치HSF1-/-MEFs핵인분리급단백질합성억제몰유영향,여단순과양화경손상조상비,P＞0.05.[결론]HSR이일충HSF1의뢰방식현저억제과양화경소치세포핵인결구여공능손상.