CAJ | 학술논문

目的:克隆、表达并纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7的sRNA伴侣蛋白Hfq.方法:利用PCR方法从EHEC O157:H7基因组中扩增出基因hfq,并插入含6xHis标签序列的原核表达载体pET28a(+)的多克隆位点中,构建重组表达质粒pET28a(+)-hfq,以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导目的基因表达,采用Western印迹法进行鉴定,通过Ni2+螯合柱纯化获得目的蛋白.结果:质粒酶切鉴定结果表明pET28a(+)-hfq重组质粒构建成功;对目的蛋白进行了融合表达,SDS-PAGE显示相对分子质量约17x103的蛋白特异表达条带;对表达产物进行亲和纯化,从上清中获得了Hfq的融合蛋白.结论:得到了sRNA伴侣蛋白Hfq,为进一步筛选与该蛋白有相互作用的sRNA,研究sRNA的功能奠定了基础.
목적:극륭、표체병순화장출혈성대장간균(EHEC)O157:H7적sRNA반려단백Hfq.방법:이용PCR방법종EHEC O157:H7기인조중확증출기인hfq,병삽입함6xHis표첨서렬적원핵표체재체pET28a(+)적다극륭위점중,구건중조표체질립pET28a(+)-hfq,이중조질립전화대장간균BL21(DE3),유도목적기인표체,채용Western인적법진행감정,통과Ni2+오합주순화획득목적단백.결과:질립매절감정결과표명pET28a(+)-hfq중조질립구건성공;대목적단백진행료융합표체,SDS-PAGE현시상대분자질량약17x103적단백특이표체조대;대표체산물진행친화순화,종상청중획득료Hfq적융합단백.결론:득도료sRNA반려단백Hfq,위진일보사선여해단백유상호작용적sRNA,연구sRNA적공능전정료기출.