CUEDC2突变体的构建及在原核和昆虫表达系统中的表达
CUEDC2돌변체적구건급재원핵화곤충표체계통중적표체
Construction and Expression of CUEDC2 Mutants in BL21 (DE3) and Sf9 Cells
  • 万方数据
    科学技术与工程 과학기술여공정
    SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
    2011年 18期 4132-4135,4138 ,共5页

    王玉博%高彦飞%李腾%常艳%穆蕊%徐金敬%王芊艺%巩伟丽%于鸣%李慧艳

    왕옥박%고언비%리등%상염%목예%서금경%왕천예%공위려%우명%리혜염

    CUEDC2%表达%昆虫%突变体 CUEDC2%錶達%昆蟲%突變體
    CUEDC2%표체%곤충%돌변체
    为构建CUEDC2的突变体并在原核和昆虫表达系统中表达验证,根据人cuedc2序列设计引物,以其突变体质粒为模板PCR扩增目的片段,酶切后连接至pET28a原核表达载体以及pFastBac1-Flag-N和pFastBac-HTA昆虫表达系统的表达载体.转化至DH5α后提取质粒,经菌液PCR、测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)及DH10Bac感受态细胞中.原核表达载体在E.coli中表达后用Ni-NTA亲和纯化,SDS-PAGE检测.昆虫表达载体提取杆粒,转染至昆虫细胞Sf9中表达.最后用western进行鉴定.结果成功构建了CUEDC2的突变体,并在原核和昆虫表达系统中表达.说明在原核和昆虫表达系统中,成功表达的CUEDC2突变体蛋白为CUEDC2的结构和功能研究奠定了基础.
    위구건CUEDC2적돌변체병재원핵화곤충표체계통중표체험증,근거인cuedc2서렬설계인물,이기돌변체질립위모판PCR확증목적편단,매절후련접지pET28a원핵표체재체이급pFastBac1-Flag-N화pFastBac-HTA곤충표체계통적표체재체.전화지DH5α후제취질립,경균액PCR、측서감정후,전입대장간균BL21(DE3)급DH10Bac감수태세포중.원핵표체재체재E.coli중표체후용Ni-NTA친화순화,SDS-PAGE검측.곤충표체재체제취간립,전염지곤충세포Sf9중표체.최후용western진행감정.결과성공구건료CUEDC2적돌변체,병재원핵화곤충표체계통중표체.설명재원핵화곤충표체계통중,성공표체적CUEDC2돌변체단백위CUEDC2적결구화공능연구전정료기출.
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