中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2011年
18期
143-147
,共5页
代文娟%唐文秀%邓涛%丁莉%骆文华%黄仕训
代文娟%唐文秀%鄧濤%丁莉%駱文華%黃仕訓
대문연%당문수%산도%정리%락문화%황사훈
狭叶坡垒%正交设计%ISSR-PCR%优化
狹葉坡壘%正交設計%ISSR-PCR%優化
협협파루%정교설계%ISSR-PCR%우화
以狭叶坡垒DNA为模板,利用正交试验分别对ISSR-PCR反应的MgC12浓度、dNTPs浓度、Taq聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定最佳退火温度和循环次数,最终确定狭叶坡垒最佳反应体系及扩增条件为:25 μL体系中1×PCR buffer,2mmol/L MgCl2,0.25 mmol/LdNTPs,0.04 U/μL Taq聚合酶,0.2 μmol/L引物,4 ng/μL DNA模板；最佳扩增程序为:94℃预变性5 min；94℃变性45 s,53℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,共35个循环；72℃最后延伸7 min.
以狹葉坡壘DNA為模闆,利用正交試驗分彆對ISSR-PCR反應的MgC12濃度、dNTPs濃度、Taq聚閤酶濃度、引物濃度、模闆DNA濃度進行瞭優化,併通過梯度PCR確定最佳退火溫度和循環次數,最終確定狹葉坡壘最佳反應體繫及擴增條件為:25 μL體繫中1×PCR buffer,2mmol/L MgCl2,0.25 mmol/LdNTPs,0.04 U/μL Taq聚閤酶,0.2 μmol/L引物,4 ng/μL DNA模闆；最佳擴增程序為:94℃預變性5 min；94℃變性45 s,53℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,共35箇循環；72℃最後延伸7 min.
이협협파루DNA위모판,이용정교시험분별대ISSR-PCR반응적MgC12농도、dNTPs농도、Taq취합매농도、인물농도、모판DNA농도진행료우화,병통과제도PCR학정최가퇴화온도화순배차수,최종학정협협파루최가반응체계급확증조건위:25 μL체계중1×PCR buffer,2mmol/L MgCl2,0.25 mmol/LdNTPs,0.04 U/μL Taq취합매,0.2 μmol/L인물,4 ng/μL DNA모판；최가확증정서위:94℃예변성5 min；94℃변성45 s,53℃퇴화45 s,72℃연신1.5 min,공35개순배；72℃최후연신7 min.
