细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2009年
12期
1076-1078
,共3页
郝文丽%江文正%闻洁君%樊燕%钱旻
郝文麗%江文正%聞潔君%樊燕%錢旻
학문려%강문정%문길군%번연%전민
LIGHT%基因克隆%原核表达%大肠杆菌
LIGHT%基因剋隆%原覈錶達%大腸桿菌
LIGHT%기인극륭%원핵표체%대장간균
目的:构建人LIGHT胞外段基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达.方法:从人外周血单核细胞来源的未成熟树突状细胞中提取总RNA,通过RT-PCR得到LIGHT胞外段基因,并将其克隆至pET32a(+)原核表达载体中,经双酶切鉴定及序列测定后的重组质粒转化入E.coli BL21,IPTG诱导表达目的蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot进行检测.结果:RT-PCR扩增出了大小为543 bp 的LIGHT胞外段基因,经测序证明序列正确.SDS-PAGE和Western blot分析证实重组质粒可表达出Mr约为41 000的蛋白.结论:成功地克隆了人LIGHT胞外段基因并在大肠杆菌中进行了表达为进一步研究LIGHT的功能打下了基础.
目的:構建人LIGHT胞外段基因的原覈錶達載體,併在大腸桿菌中誘導錶達.方法:從人外週血單覈細胞來源的未成熟樹突狀細胞中提取總RNA,通過RT-PCR得到LIGHT胞外段基因,併將其剋隆至pET32a(+)原覈錶達載體中,經雙酶切鑒定及序列測定後的重組質粒轉化入E.coli BL21,IPTG誘導錶達目的蛋白,併用SDS-PAGE和Western blot進行檢測.結果:RT-PCR擴增齣瞭大小為543 bp 的LIGHT胞外段基因,經測序證明序列正確.SDS-PAGE和Western blot分析證實重組質粒可錶達齣Mr約為41 000的蛋白.結論:成功地剋隆瞭人LIGHT胞外段基因併在大腸桿菌中進行瞭錶達為進一步研究LIGHT的功能打下瞭基礎.
목적:구건인LIGHT포외단기인적원핵표체재체,병재대장간균중유도표체.방법:종인외주혈단핵세포래원적미성숙수돌상세포중제취총RNA,통과RT-PCR득도LIGHT포외단기인,병장기극륭지pET32a(+)원핵표체재체중,경쌍매절감정급서렬측정후적중조질립전화입E.coli BL21,IPTG유도표체목적단백,병용SDS-PAGE화Western blot진행검측.결과:RT-PCR확증출료대소위543 bp 적LIGHT포외단기인,경측서증명서렬정학.SDS-PAGE화Western blot분석증실중조질립가표체출Mr약위41 000적단백.결론:성공지극륭료인LIGHT포외단기인병재대장간균중진행료표체위진일보연구LIGHT적공능타하료기출.
