中华实验外科杂志
中華實驗外科雜誌
중화실험외과잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY
2007年
8期
923-925
,共3页
许晓东%张德意%朱冠保%张丽芳
許曉東%張德意%硃冠保%張麗芳
허효동%장덕의%주관보%장려방
黑色素瘤抗原%表位%疫苗
黑色素瘤抗原%錶位%疫苗
흑색소류항원%표위%역묘
目的 构建人乳头瘤病毒(HPV)6b型结构蛋白L1-黑色素瘤抗原(MAGE-A3)细胞毒T淋巴细胞(CTL)表位嵌合基因并表达目的蛋白,为下一步制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗提供理论基础和实验依据.方法 将MAGE-A3 CTL表位基因插入到HPV6bL1的羧基端序列中,将目的基因连入真核表达转移载体pFastBacTM1,构建重组质粒pFastBacTM1/HPV6bL1/MAGEA3-CTL,转化DH10Bac感受态细胞,获得重组杆状病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL;将重组杆状病毒转染sf-9昆虫细胞表达嵌合目的蛋白,并经SDS-Page电泳、考马斯亮蓝染色及Western blot分析鉴定.结果 成功构建了重组质粒pFastBacTM1/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,获得了重组杆状病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,并在真核细胞sf-9昆虫细胞中成功表达了嵌合目的蛋白.结论 通过基因克隆方法能成功的将MAGE-A3 CTL表位基因插入到HPV6bL1基因中,并能在真核细胞表达系统中表达出嵌合目的蛋白,为进一步制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗提供理论基础和实验依据.
目的 構建人乳頭瘤病毒(HPV)6b型結構蛋白L1-黑色素瘤抗原(MAGE-A3)細胞毒T淋巴細胞(CTL)錶位嵌閤基因併錶達目的蛋白,為下一步製備HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌閤疫苗提供理論基礎和實驗依據.方法 將MAGE-A3 CTL錶位基因插入到HPV6bL1的羧基耑序列中,將目的基因連入真覈錶達轉移載體pFastBacTM1,構建重組質粒pFastBacTM1/HPV6bL1/MAGEA3-CTL,轉化DH10Bac感受態細胞,穫得重組桿狀病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL;將重組桿狀病毒轉染sf-9昆蟲細胞錶達嵌閤目的蛋白,併經SDS-Page電泳、攷馬斯亮藍染色及Western blot分析鑒定.結果 成功構建瞭重組質粒pFastBacTM1/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,穫得瞭重組桿狀病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,併在真覈細胞sf-9昆蟲細胞中成功錶達瞭嵌閤目的蛋白.結論 通過基因剋隆方法能成功的將MAGE-A3 CTL錶位基因插入到HPV6bL1基因中,併能在真覈細胞錶達繫統中錶達齣嵌閤目的蛋白,為進一步製備HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌閤疫苗提供理論基礎和實驗依據.
목적 구건인유두류병독(HPV)6b형결구단백L1-흑색소류항원(MAGE-A3)세포독T림파세포(CTL)표위감합기인병표체목적단백,위하일보제비HPV6bL1/MAGE-A3-CTL감합역묘제공이론기출화실험의거.방법 장MAGE-A3 CTL표위기인삽입도HPV6bL1적최기단서렬중,장목적기인련입진핵표체전이재체pFastBacTM1,구건중조질립pFastBacTM1/HPV6bL1/MAGEA3-CTL,전화DH10Bac감수태세포,획득중조간상병독Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL;장중조간상병독전염sf-9곤충세포표체감합목적단백,병경SDS-Page전영、고마사량람염색급Western blot분석감정.결과 성공구건료중조질립pFastBacTM1/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,획득료중조간상병독Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL,병재진핵세포sf-9곤충세포중성공표체료감합목적단백.결론 통과기인극륭방법능성공적장MAGE-A3 CTL표위기인삽입도HPV6bL1기인중,병능재진핵세포표체계통중표체출감합목적단백,위진일보제비HPV6bL1/MAGE-A3-CTL감합역묘제공이론기출화실험의거.
