CAJ | 학술논문

探讨大肠杆菌细胞质氧化还原环境对重组蛋白溶解性的影响.选择含有1对二硫键的牛碱性成纤维细胞生长因子(BbFGF)作为简单蛋白的模式分子,选择含有2对二硫键的人抗HBsAg单链抗体(HBscFv)作为复杂蛋白的模式分子,分别构建表达质粒并转化普通宿主菌和还原酶缺陷型宿主菌E. coli Origami(DE3),比较表达产物的溶解性和纯化产物的活性.结果发现,BbFGF在普通宿主菌中大部分形成包涵体,在Origami(DE3)中为可溶性表达,但表达量降低.两种工程菌的表达产物经离子交换和肝素亲和层析两步纯化后,MTT法测定活性,发现来自还原酶缺陷型宿主菌的BbFGF活性高于普通宿主菌表达产物,二者的ED50分别是1.6 ng/mL和2.2 ng/mL;HBscFv在两种宿主菌中均形成包涵体,包涵体以6 mol/L盐酸胍缓冲液溶解后,镍离子螯合亲和层析纯化并透析复性,间接ELISA测定抗原结合活性,发现二者活性无明显差异,但在Origami(DE3)菌体破碎后的的上清中可检测到HBscFv活性,纯化后产量为1～2 mg/L,而在普通宿主菌破碎后的上清中检测不到HBscFv活性.上述结果说明,改变宿主菌细胞质氧化还原环境对于含有1～2对二硫键的重组蛋白的可溶性表达具有明显促进作用.
탐토대장간균세포질양화환원배경대중조단백용해성적영향.선택함유1대이류건적우감성성섬유세포생장인자(BbFGF)작위간단단백적모식분자,선택함유2대이류건적인항HBsAg단련항체(HBscFv)작위복잡단백적모식분자,분별구건표체질립병전화보통숙주균화환원매결함형숙주균E. coli Origami(DE3),비교표체산물적용해성화순화산물적활성.결과발현,BbFGF재보통숙주균중대부분형성포함체,재Origami(DE3)중위가용성표체,단표체량강저.량충공정균적표체산물경리자교환화간소친화층석량보순화후,MTT법측정활성,발현래자환원매결함형숙주균적BbFGF활성고우보통숙주균표체산물,이자적ED50분별시1.6 ng/mL화2.2 ng/mL;HBscFv재량충숙주균중균형성포함체,포함체이6 mol/L염산고완충액용해후,얼리자오합친화층석순화병투석복성,간접ELISA측정항원결합활성,발현이자활성무명현차이,단재Origami(DE3)균체파쇄후적적상청중가검측도HBscFv활성,순화후산량위1～2 mg/L,이재보통숙주균파쇄후적상청중검측불도HBscFv활성.상술결과설명,개변숙주균세포질양화환원배경대우함유1～2대이류건적중조단백적가용성표체구유명현촉진작용.