CAJ | 학술논문

目的:对全人源肝癌噬茵体单链抗体库进行鉴定,筛选肝癌抗体,同时对抗体的活性及特异性进行鉴定.方法:PCR鉴定阳性重组菌TG1中人肝癌ScFv的插入率.先以人成纤维细胞吸附后再以体外培养的肝癌细胞SMMC-7721为抗原对所建抗体库进行3轮"吸附-洗脱-扩增"的亲和筛选.将筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定;通过ELISA法及FCM鉴定其与人肝癌细胞及正常细胞的结合活性.结果:ScFv基因插入率为70%.在亲和筛选过程中,肝癌噬茵体单链抗体得到富集,收获率逐轮得到提高,第3轮为第1轮的214倍.筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定,均可检测到目的基因.ELISA分析结果显示18个克隆与SMMC-7721呈阳性反应,阳性率为90%,15个克隆与成纤维细胞有交叉反应.得到3株肝癌单链抗体.ScFv的FCM鉴定表明,以正常胎肝细胞L-02为对照,ScFv与肝癌结合比率为41.3%.特异性鉴定表明,其与肝癌细胞结合活性明显高于正常细胞.结论:利用噬茵体抗体库技术结合减数筛选得到了肝癌噬菌体单链抗体及其基因,且筛选后的抗体片段与人肝癌细胞有特异性的结合活性.
목적:대전인원간암서인체단련항체고진행감정,사선간암항체,동시대항체적활성급특이성진행감정.방법:PCR감정양성중조균TG1중인간암ScFv적삽입솔.선이인성섬유세포흡부후재이체외배양적간암세포SMMC-7721위항원대소건항체고진행3륜"흡부-세탈-확증"적친화사선.장사선후적ScFv진행PCR감정급쌍매절감정;통과ELISA법급FCM감정기여인간암세포급정상세포적결합활성.결과:ScFv기인삽입솔위70%.재친화사선과정중,간암서인체단련항체득도부집,수획솔축륜득도제고,제3륜위제1륜적214배.사선후적ScFv진행PCR감정급쌍매절감정,균가검측도목적기인.ELISA분석결과현시18개극륭여SMMC-7721정양성반응,양성솔위90%,15개극륭여성섬유세포유교차반응.득도3주간암단련항체.ScFv적FCM감정표명,이정상태간세포L-02위대조,ScFv여간암결합비솔위41.3%.특이성감정표명,기여간암세포결합활성명현고우정상세포.결론:이용서인체항체고기술결합감수사선득도료간암서균체단련항체급기기인,차사선후적항체편단여인간암세포유특이성적결합활성.