CAJ | 학술논문

目的探讨肿瘤坏死因子信号肽(TNF-SP)在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位.方法采用聚合酶链反应(PCR)技术,以TNF-SP-pcDNA3.0质粒为模板扩增TNF-SP基因,采用PCR产物的粘端克隆法,将TNF-SP定向克隆入pEGFP-N1的多克隆位点,构建TNF-SP-EGFP重组质粒,酶切,PCR检测,序列分析鉴定,采用脂质体转染法,将TNF-SP-EGFP融合基因转染COS-7细胞进行表达,经碘化丙啶(PI)染色后以激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位.结果 PCR检测,酶切鉴定及测序证实目的基因TNF-SP正确连接到pEGFP-N1的多克隆位点.TNF-SP-EGFP重组体转染COS-7后,激光共聚焦显微镜显示TNF-SP-EGFP在细胞质表达.结论成功地构建了TNF-SP-EGFP融合蛋白真核表达质粒,在COS-7细胞中获得表达,并证实其定位于细胞质.
목적 탐토종류배사인자신호태(TNF-SP)재포유동물세포적표체화아세포정위.방법 채용취합매련반응(PCR)기술,이TNF-SP-pcDNA3.0질립위모판확증TNF-SP기인,채용PCR산물적점단극륭법,장TNF-SP정향극륭입pEGFP-N1적다극륭위점,구건TNF-SP-EGFP중조질립,매절,PCR검측,서렬분석감정,채용지질체전염법,장TNF-SP-EGFP융합기인전염COS-7세포진행표체,경전화병정(PI)염색후이격광공취초현미경분석융합단백적표체급기아세포정위.결과 PCR검측,매절감정급측서증실목적기인TNF-SP정학련접도pEGFP-N1적다극륭위점.TNF-SP-EGFP중조체전염COS-7후,격광공취초현미경현시TNF-SP-EGFP재세포질표체.결론 성공지구건료TNF-SP-EGFP융합단백진핵표체질립,재COS-7세포중획득표체,병증실기정위우세포질.