第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2007年
20期
1925-1928
,共4页
杨聪%陈文生%邓国宏%汪荣泉%肖天利
楊聰%陳文生%鄧國宏%汪榮泉%肖天利
양총%진문생%산국굉%왕영천%초천리
OATP-C%定点突变%底物摄取%HEK293细胞
OATP-C%定點突變%底物攝取%HEK293細胞
OATP-C%정점돌변%저물섭취%HEK293세포
目的 研究人肝脏特异的有机阴离子转运蛋白基因OATP-C蛋白分子膜外区保守的490位阳离子赖氨酸对其有机阴离子底物摄取能力的影响.方法 从人肝脏mRNA中克隆OATP-C 野生型基因全长cDNA序列,通过定点突变将高度保守的第490位赖氨酸残基突变为中性氨基酸-苏氨酸,构建其C端的GFP融合蛋白的真核表达载体,转染HEK293细胞,观察突变体的细胞膜定位能力和底物摄取功能的变化.结果 OATP-C野生型及突变体均能定位表达于HEK293细胞质膜;[3H]硫酸盐雌酮底物摄取实验显示,突变体5 min底物摄取量较野生型下降了38.66%,浓度依赖的[3H]硫酸盐雌酮底物摄取动力学分析表证明,突变体Km和Vmax分别明显增高和降低.结论 OATP-C蛋白膜外区第490位赖氨酸是关键的功能氨基酸,是其重要的结构功能单位.
目的 研究人肝髒特異的有機陰離子轉運蛋白基因OATP-C蛋白分子膜外區保守的490位暘離子賴氨痠對其有機陰離子底物攝取能力的影響.方法 從人肝髒mRNA中剋隆OATP-C 野生型基因全長cDNA序列,通過定點突變將高度保守的第490位賴氨痠殘基突變為中性氨基痠-囌氨痠,構建其C耑的GFP融閤蛋白的真覈錶達載體,轉染HEK293細胞,觀察突變體的細胞膜定位能力和底物攝取功能的變化.結果 OATP-C野生型及突變體均能定位錶達于HEK293細胞質膜;[3H]硫痠鹽雌酮底物攝取實驗顯示,突變體5 min底物攝取量較野生型下降瞭38.66%,濃度依賴的[3H]硫痠鹽雌酮底物攝取動力學分析錶證明,突變體Km和Vmax分彆明顯增高和降低.結論 OATP-C蛋白膜外區第490位賴氨痠是關鍵的功能氨基痠,是其重要的結構功能單位.
목적 연구인간장특이적유궤음리자전운단백기인OATP-C단백분자막외구보수적490위양리자뢰안산대기유궤음리자저물섭취능력적영향.방법 종인간장mRNA중극륭OATP-C 야생형기인전장cDNA서렬,통과정점돌변장고도보수적제490위뢰안산잔기돌변위중성안기산-소안산,구건기C단적GFP융합단백적진핵표체재체,전염HEK293세포,관찰돌변체적세포막정위능력화저물섭취공능적변화.결과 OATP-C야생형급돌변체균능정위표체우HEK293세포질막;[3H]류산염자동저물섭취실험현시,돌변체5 min저물섭취량교야생형하강료38.66%,농도의뢰적[3H]류산염자동저물섭취동역학분석표증명,돌변체Km화Vmax분별명현증고화강저.결론 OATP-C단백막외구제490위뢰안산시관건적공능안기산,시기중요적결구공능단위.
