细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
3期
260-262
,共3页
张红%张改平%章金刚%杨艳艳%易明林%李姣%韩鸿鹏
張紅%張改平%章金剛%楊豔豔%易明林%李姣%韓鴻鵬
장홍%장개평%장금강%양염염%역명림%리교%한홍붕
鸡Igλ轻链%pcDNA-λ%COS7细胞%真核分泌表达%单克隆抗体
鷄Igλ輕鏈%pcDNA-λ%COS7細胞%真覈分泌錶達%單剋隆抗體
계Igλ경련%pcDNA-λ%COS7세포%진핵분비표체%단극륭항체
目的: 构建重组载体pcDNA-λ并在COS7细胞分泌表达鸡Igλ轻链, 制备抗鸡Igλ轻链的单克隆抗体(mAb).方法: PCR扩增带有信号肽的鸡Igλ轻链基因, 限制性酶切消化后, 定向克隆于真核表达载体pcDNA3, 构建具有6×His标签、分泌表达的重组载体pcDNA-λ.重组载体转染COS7细胞后, SDS-PAGE分析真核表达载体pcDNA-λ在COS7细胞的分泌表达.用2×106个雏鸡B淋巴细胞免疫BALB/c小鼠, 取脾细胞与骨髓瘤细胞融合, 分别采用细胞免疫荧光和间接ELISA筛选阳性杂交瘤克隆.结果: 成功构建分泌表达鸡Igλ轻链的重组载体, SDS-PAGE分析表明在COS7细胞上清有目的蛋白的分泌表达.杂交瘤细胞经筛选与鉴定, 获得2株分泌抗鸡Igλ轻链mAb的杂交瘤细胞株, Western blot检测到该mAb对重组鸡Igλ轻链的反应性.结论: 构建了重组表达载体pcDNA-λ并在COS7细胞上清分泌表达了重组鸡Igλ轻链.并用淋巴细胞杂交瘤技术成功筛选出抗鸡Igλ轻链mAb.为深入研究鸡Igλ轻链的结构与功能奠定了基础.
目的: 構建重組載體pcDNA-λ併在COS7細胞分泌錶達鷄Igλ輕鏈, 製備抗鷄Igλ輕鏈的單剋隆抗體(mAb).方法: PCR擴增帶有信號肽的鷄Igλ輕鏈基因, 限製性酶切消化後, 定嚮剋隆于真覈錶達載體pcDNA3, 構建具有6×His標籤、分泌錶達的重組載體pcDNA-λ.重組載體轉染COS7細胞後, SDS-PAGE分析真覈錶達載體pcDNA-λ在COS7細胞的分泌錶達.用2×106箇雛鷄B淋巴細胞免疫BALB/c小鼠, 取脾細胞與骨髓瘤細胞融閤, 分彆採用細胞免疫熒光和間接ELISA篩選暘性雜交瘤剋隆.結果: 成功構建分泌錶達鷄Igλ輕鏈的重組載體, SDS-PAGE分析錶明在COS7細胞上清有目的蛋白的分泌錶達.雜交瘤細胞經篩選與鑒定, 穫得2株分泌抗鷄Igλ輕鏈mAb的雜交瘤細胞株, Western blot檢測到該mAb對重組鷄Igλ輕鏈的反應性.結論: 構建瞭重組錶達載體pcDNA-λ併在COS7細胞上清分泌錶達瞭重組鷄Igλ輕鏈.併用淋巴細胞雜交瘤技術成功篩選齣抗鷄Igλ輕鏈mAb.為深入研究鷄Igλ輕鏈的結構與功能奠定瞭基礎.
목적: 구건중조재체pcDNA-λ병재COS7세포분비표체계Igλ경련, 제비항계Igλ경련적단극륭항체(mAb).방법: PCR확증대유신호태적계Igλ경련기인, 한제성매절소화후, 정향극륭우진핵표체재체pcDNA3, 구건구유6×His표첨、분비표체적중조재체pcDNA-λ.중조재체전염COS7세포후, SDS-PAGE분석진핵표체재체pcDNA-λ재COS7세포적분비표체.용2×106개추계B림파세포면역BALB/c소서, 취비세포여골수류세포융합, 분별채용세포면역형광화간접ELISA사선양성잡교류극륭.결과: 성공구건분비표체계Igλ경련적중조재체, SDS-PAGE분석표명재COS7세포상청유목적단백적분비표체.잡교류세포경사선여감정, 획득2주분비항계Igλ경련mAb적잡교류세포주, Western blot검측도해mAb대중조계Igλ경련적반응성.결론: 구건료중조표체재체pcDNA-λ병재COS7세포상청분비표체료중조계Igλ경련.병용림파세포잡교류기술성공사선출항계Igλ경련mAb.위심입연구계Igλ경련적결구여공능전정료기출.
