四川医学
四川醫學
사천의학
SICHUAN MEDICAL JOURNAL
2009年
4期
460-462
,共3页
朱晓燕%王雅静%毕世樑%张仁刚
硃曉燕%王雅靜%畢世樑%張仁剛
주효연%왕아정%필세량%장인강
阴道毛滴虫%粘附蛋白65-3基因%真核表达载体
陰道毛滴蟲%粘附蛋白65-3基因%真覈錶達載體
음도모적충%점부단백65-3기인%진핵표체재체
目的 构建并鉴定阴道毛滴虫粘附蛋白65-3基因的真核表达裁体.方法 Trizol试剂提取阴道毛滴虫株基因组总RNA,RT-PCR扩增粘附蛋白65-3基因,定向克隆入pMD-18T线性质粒,重组子经双醇切、PCR鉴定及测序分析.鉴定正确的重组质粒pMD-18T-ap65-3和pcDNA3.1(+)空质粒径BamH Ⅰ和Xho Ⅰ限制性内切酶双酶切后,凝胶电泳纯化回收目的 片段.将粘附蛋白65-3基因亚克隆入pcDNA3.1(+)载体并进行筛选和鉴定.结果 成功克隆出阴道毛滴虫粘附蛋白65-3基因,序列分析发现该基因的开放阅读柜长为1704bp,与GenBank上公布的粘附蛋白65-3基因序列比较,同源性高迭99.6%.经PCR鉴定,限制性酶切鉴定及测序鉴定,正确构建出重组质拉pcDNA3.1-ap65-3.结论 成功克隆出粘附蛋白65-3基因并构建出真核表达质粒pcDNA3.1-ap65-3,为进一步研究该基因的功能及滴虫的致病机制奠定实验基础.
目的 構建併鑒定陰道毛滴蟲粘附蛋白65-3基因的真覈錶達裁體.方法 Trizol試劑提取陰道毛滴蟲株基因組總RNA,RT-PCR擴增粘附蛋白65-3基因,定嚮剋隆入pMD-18T線性質粒,重組子經雙醇切、PCR鑒定及測序分析.鑒定正確的重組質粒pMD-18T-ap65-3和pcDNA3.1(+)空質粒徑BamH Ⅰ和Xho Ⅰ限製性內切酶雙酶切後,凝膠電泳純化迴收目的 片段.將粘附蛋白65-3基因亞剋隆入pcDNA3.1(+)載體併進行篩選和鑒定.結果 成功剋隆齣陰道毛滴蟲粘附蛋白65-3基因,序列分析髮現該基因的開放閱讀櫃長為1704bp,與GenBank上公佈的粘附蛋白65-3基因序列比較,同源性高迭99.6%.經PCR鑒定,限製性酶切鑒定及測序鑒定,正確構建齣重組質拉pcDNA3.1-ap65-3.結論 成功剋隆齣粘附蛋白65-3基因併構建齣真覈錶達質粒pcDNA3.1-ap65-3,為進一步研究該基因的功能及滴蟲的緻病機製奠定實驗基礎.
목적 구건병감정음도모적충점부단백65-3기인적진핵표체재체.방법 Trizol시제제취음도모적충주기인조총RNA,RT-PCR확증점부단백65-3기인,정향극륭입pMD-18T선성질립,중조자경쌍순절、PCR감정급측서분석.감정정학적중조질립pMD-18T-ap65-3화pcDNA3.1(+)공질립경BamH Ⅰ화Xho Ⅰ한제성내절매쌍매절후,응효전영순화회수목적 편단.장점부단백65-3기인아극륭입pcDNA3.1(+)재체병진행사선화감정.결과 성공극륭출음도모적충점부단백65-3기인,서렬분석발현해기인적개방열독거장위1704bp,여GenBank상공포적점부단백65-3기인서렬비교,동원성고질99.6%.경PCR감정,한제성매절감정급측서감정,정학구건출중조질랍pcDNA3.1-ap65-3.결론 성공극륭출점부단백65-3기인병구건출진핵표체질립pcDNA3.1-ap65-3,위진일보연구해기인적공능급적충적치병궤제전정실험기출.
