生物学杂志
生物學雜誌
생물학잡지
JOURNAL OF BIOLOGY
2010年
4期
5-7
,共3页
陈舒丽%刘德立%蔡朝晖%刘汉才%罗德生
陳舒麗%劉德立%蔡朝暉%劉漢纔%囉德生
진서려%류덕립%채조휘%류한재%라덕생
细胞色素P450nor%克隆%表达%大肠杆菌
細胞色素P450nor%剋隆%錶達%大腸桿菌
세포색소P450nor%극륭%표체%대장간균
研究改造了原有的未能高效表达的重组表达载体pRSET-p450nor,通过PCR方法,去除了P450nor起始密码子ATG上游的59个碱基序列.将真菌细胞色素P450nor基因首先克隆至克隆载体pBluescript Ⅱ上,然后亚克隆到高效表达载体pET-28上,得到了重组表达载体pET-p450nor.该基因在30℃、0.1mM IPTG诱导下在大肠杆菌中获得高效表达融合蛋白His-P450nor.SDS-PAGE蛋白电泳表明在45kD处出现强特异性带.将大量表达的重组蛋白用Ni-NTA亲和层析柱纯化,得到了单一的目的条带.
研究改造瞭原有的未能高效錶達的重組錶達載體pRSET-p450nor,通過PCR方法,去除瞭P450nor起始密碼子ATG上遊的59箇堿基序列.將真菌細胞色素P450nor基因首先剋隆至剋隆載體pBluescript Ⅱ上,然後亞剋隆到高效錶達載體pET-28上,得到瞭重組錶達載體pET-p450nor.該基因在30℃、0.1mM IPTG誘導下在大腸桿菌中穫得高效錶達融閤蛋白His-P450nor.SDS-PAGE蛋白電泳錶明在45kD處齣現彊特異性帶.將大量錶達的重組蛋白用Ni-NTA親和層析柱純化,得到瞭單一的目的條帶.
연구개조료원유적미능고효표체적중조표체재체pRSET-p450nor,통과PCR방법,거제료P450nor기시밀마자ATG상유적59개감기서렬.장진균세포색소P450nor기인수선극륭지극륭재체pBluescript Ⅱ상,연후아극륭도고효표체재체pET-28상,득도료중조표체재체pET-p450nor.해기인재30℃、0.1mM IPTG유도하재대장간균중획득고효표체융합단백His-P450nor.SDS-PAGE단백전영표명재45kD처출현강특이성대.장대량표체적중조단백용Ni-NTA친화층석주순화,득도료단일적목적조대.
