中国普外基础与临床杂志
中國普外基礎與臨床雜誌
중국보외기출여림상잡지
CHINESE JOURNAL OF BASES AND CLINICS IN GENERAL SURGERY
2011年
5期
507-513
,共7页
树突状细胞%Walker-256肿瘤细胞%细胞融合%种植性肝癌%免疫治疗%肿瘤新生血管
樹突狀細胞%Walker-256腫瘤細胞%細胞融閤%種植性肝癌%免疫治療%腫瘤新生血管
수돌상세포%Walker-256종류세포%세포융합%충식성간암%면역치료%종류신생혈관
目的 研究树突状细胞(DC)、Walker-256肿瘤细胞融合的肿瘤疫苗对大鼠肝癌模型的抗肿瘤免疫作用及其抑制肿瘤新生血管的机理.方法 利用50%聚乙二醇(PEG)法诱导Walker256肿瘤细胞与成熟DC融合,制备DC-Walker-256融合瘤苗.取6～8周龄健康雄性SD大鼠32只,建立种植性肝癌模型,随机分为4组:融合瘤苗组、混合培养组、单纯DC组和空白对照组,每组8只.建模后第7和14天各组大鼠分别皮下注射融合瘤苗、DC-Walker-256和DC混合培养细胞、单纯DC和PBS.第28天处死各组大鼠,观察各组大鼠肝脏肿瘤情况;收集大鼠脾脏制备淋巴细胞,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)法检测大鼠抗原特异性的细胞毒T淋巴细胞(CTL),采用免疫组织化学检测肿瘤微血管密度(MVD)计数以及血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、血管生成素(ANG)-1和ANG-2的蛋白表达.结果 融合瘤苗组、混合培养组、单纯DC组和空白对照组大鼠术后28 d分别存活8、5、6和3只;除融合瘤苗组外,其他3组大鼠均不同程度存在活动少、食纳差、皮毛光泽差及腹水形成.除融合瘤苗组2只大鼠无明显肉眼肿瘤形成外,其余存活大鼠均可见肿瘤形成.①大鼠肝脏肿瘤重量:融合瘤苗组[(32.4±9.2)g]明显轻于混合培养组[(67.3±5.1)g,P=0.031]、单纯DC组[(75.0±8.3)g,P=0.019]和空白对照组[(86.6±10.5)g,P=0.0083.②CTL每孔斑点数:融合瘤苗组[(404.51±25.34)个]明显多于其他3组[混合培养组:(214.54±21.45)个,P=0.019;单纯DC组:(226.52±32.55)个,P=0.025;空白对照组:(56.54±16.21)个,P=0.001].③MVD计数:融合瘤苗组为(24.12±2.32)个/HP,明显低于混合培养组[(40.34±1.29)个/HP,P=0.025]、单纯DC组[(42.36±3.16)个/HP,P=0.035]和空白对照组[(56.48±5.16)个/HP,P=0.006];混合培养组和单纯DC组大鼠MVD计数均少于空白对照组(P=0.040和P=0.043),而混合培养组与单纯DC组之间差异无统计学意义(P=0.165).④VEGF-A蛋白表达阳性率:融合瘤苗组为23.2%,明显低于混合培养组(42.5%,P=0.031)、单纯DC组(61.3%,P=0.019)和空白对照组(89.6%,P=0.003);混合培养组和单纯DC组均低于空白对照组(P=0.027和P=0.038),而混合培养组与单纯DC组之间差异则无统计学意义(P=0.089).⑤ANG-1蛋白表达阳性率:融合瘤苗组大鼠为43.2%,与混合培养组(46.3%,P=0.292)、单纯DC组(51.3%,P=0.183)和空白对照组(49.6%,P=0.179)比较差异无统计学意义;混合培养组与单纯DC组(P=0.242)、混合培养组与空白对照组(P=0.347)、单纯DC组和空白对照组(P=0.182)之间也无统计学意义.⑥ANG-2蛋白表达阳性率在融合瘤苗组为19.2%,明显低于混合培养组(62.3%,P=0.007)、单纯DC组(67.3%,P=0.005)和空白对照组(71.6%,P=0.004);混合培养组与单纯DC组(P=0.634)、混合培养组与空白对照组(P=0.483)、单纯DC组和空白对照组(P=0.379)之间差异则无统计学意义.结论 融合瘤苗能够诱导CD8+ CTL建立有效的抗肿瘤免疫,同时下调VEGF和ANG-2的水平,抑制肿瘤新生血管,从而达到治疗肿瘤的目的.
目的 研究樹突狀細胞(DC)、Walker-256腫瘤細胞融閤的腫瘤疫苗對大鼠肝癌模型的抗腫瘤免疫作用及其抑製腫瘤新生血管的機理.方法 利用50%聚乙二醇(PEG)法誘導Walker256腫瘤細胞與成熟DC融閤,製備DC-Walker-256融閤瘤苗.取6～8週齡健康雄性SD大鼠32隻,建立種植性肝癌模型,隨機分為4組:融閤瘤苗組、混閤培養組、單純DC組和空白對照組,每組8隻.建模後第7和14天各組大鼠分彆皮下註射融閤瘤苗、DC-Walker-256和DC混閤培養細胞、單純DC和PBS.第28天處死各組大鼠,觀察各組大鼠肝髒腫瘤情況;收集大鼠脾髒製備淋巴細胞,酶聯免疫斑點試驗(ELISPOT)法檢測大鼠抗原特異性的細胞毒T淋巴細胞(CTL),採用免疫組織化學檢測腫瘤微血管密度(MVD)計數以及血管內皮生長因子-A(VEGF-A)、血管生成素(ANG)-1和ANG-2的蛋白錶達.結果 融閤瘤苗組、混閤培養組、單純DC組和空白對照組大鼠術後28 d分彆存活8、5、6和3隻;除融閤瘤苗組外,其他3組大鼠均不同程度存在活動少、食納差、皮毛光澤差及腹水形成.除融閤瘤苗組2隻大鼠無明顯肉眼腫瘤形成外,其餘存活大鼠均可見腫瘤形成.①大鼠肝髒腫瘤重量:融閤瘤苗組[(32.4±9.2)g]明顯輕于混閤培養組[(67.3±5.1)g,P=0.031]、單純DC組[(75.0±8.3)g,P=0.019]和空白對照組[(86.6±10.5)g,P=0.0083.②CTL每孔斑點數:融閤瘤苗組[(404.51±25.34)箇]明顯多于其他3組[混閤培養組:(214.54±21.45)箇,P=0.019;單純DC組:(226.52±32.55)箇,P=0.025;空白對照組:(56.54±16.21)箇,P=0.001].③MVD計數:融閤瘤苗組為(24.12±2.32)箇/HP,明顯低于混閤培養組[(40.34±1.29)箇/HP,P=0.025]、單純DC組[(42.36±3.16)箇/HP,P=0.035]和空白對照組[(56.48±5.16)箇/HP,P=0.006];混閤培養組和單純DC組大鼠MVD計數均少于空白對照組(P=0.040和P=0.043),而混閤培養組與單純DC組之間差異無統計學意義(P=0.165).④VEGF-A蛋白錶達暘性率:融閤瘤苗組為23.2%,明顯低于混閤培養組(42.5%,P=0.031)、單純DC組(61.3%,P=0.019)和空白對照組(89.6%,P=0.003);混閤培養組和單純DC組均低于空白對照組(P=0.027和P=0.038),而混閤培養組與單純DC組之間差異則無統計學意義(P=0.089).⑤ANG-1蛋白錶達暘性率:融閤瘤苗組大鼠為43.2%,與混閤培養組(46.3%,P=0.292)、單純DC組(51.3%,P=0.183)和空白對照組(49.6%,P=0.179)比較差異無統計學意義;混閤培養組與單純DC組(P=0.242)、混閤培養組與空白對照組(P=0.347)、單純DC組和空白對照組(P=0.182)之間也無統計學意義.⑥ANG-2蛋白錶達暘性率在融閤瘤苗組為19.2%,明顯低于混閤培養組(62.3%,P=0.007)、單純DC組(67.3%,P=0.005)和空白對照組(71.6%,P=0.004);混閤培養組與單純DC組(P=0.634)、混閤培養組與空白對照組(P=0.483)、單純DC組和空白對照組(P=0.379)之間差異則無統計學意義.結論 融閤瘤苗能夠誘導CD8+ CTL建立有效的抗腫瘤免疫,同時下調VEGF和ANG-2的水平,抑製腫瘤新生血管,從而達到治療腫瘤的目的.
목적 연구수돌상세포(DC)、Walker-256종류세포융합적종류역묘대대서간암모형적항종류면역작용급기억제종류신생혈관적궤리.방법 이용50%취을이순(PEG)법유도Walker256종류세포여성숙DC융합,제비DC-Walker-256융합류묘.취6～8주령건강웅성SD대서32지,건립충식성간암모형,수궤분위4조:융합류묘조、혼합배양조、단순DC조화공백대조조,매조8지.건모후제7화14천각조대서분별피하주사융합류묘、DC-Walker-256화DC혼합배양세포、단순DC화PBS.제28천처사각조대서,관찰각조대서간장종류정황;수집대서비장제비림파세포,매련면역반점시험(ELISPOT)법검측대서항원특이성적세포독T림파세포(CTL),채용면역조직화학검측종류미혈관밀도(MVD)계수이급혈관내피생장인자-A(VEGF-A)、혈관생성소(ANG)-1화ANG-2적단백표체.결과 융합류묘조、혼합배양조、단순DC조화공백대조조대서술후28 d분별존활8、5、6화3지;제융합류묘조외,기타3조대서균불동정도존재활동소、식납차、피모광택차급복수형성.제융합류묘조2지대서무명현육안종류형성외,기여존활대서균가견종류형성.①대서간장종류중량:융합류묘조[(32.4±9.2)g]명현경우혼합배양조[(67.3±5.1)g,P=0.031]、단순DC조[(75.0±8.3)g,P=0.019]화공백대조조[(86.6±10.5)g,P=0.0083.②CTL매공반점수:융합류묘조[(404.51±25.34)개]명현다우기타3조[혼합배양조:(214.54±21.45)개,P=0.019;단순DC조:(226.52±32.55)개,P=0.025;공백대조조:(56.54±16.21)개,P=0.001].③MVD계수:융합류묘조위(24.12±2.32)개/HP,명현저우혼합배양조[(40.34±1.29)개/HP,P=0.025]、단순DC조[(42.36±3.16)개/HP,P=0.035]화공백대조조[(56.48±5.16)개/HP,P=0.006];혼합배양조화단순DC조대서MVD계수균소우공백대조조(P=0.040화P=0.043),이혼합배양조여단순DC조지간차이무통계학의의(P=0.165).④VEGF-A단백표체양성솔:융합류묘조위23.2%,명현저우혼합배양조(42.5%,P=0.031)、단순DC조(61.3%,P=0.019)화공백대조조(89.6%,P=0.003);혼합배양조화단순DC조균저우공백대조조(P=0.027화P=0.038),이혼합배양조여단순DC조지간차이칙무통계학의의(P=0.089).⑤ANG-1단백표체양성솔:융합류묘조대서위43.2%,여혼합배양조(46.3%,P=0.292)、단순DC조(51.3%,P=0.183)화공백대조조(49.6%,P=0.179)비교차이무통계학의의;혼합배양조여단순DC조(P=0.242)、혼합배양조여공백대조조(P=0.347)、단순DC조화공백대조조(P=0.182)지간야무통계학의의.⑥ANG-2단백표체양성솔재융합류묘조위19.2%,명현저우혼합배양조(62.3%,P=0.007)、단순DC조(67.3%,P=0.005)화공백대조조(71.6%,P=0.004);혼합배양조여단순DC조(P=0.634)、혼합배양조여공백대조조(P=0.483)、단순DC조화공백대조조(P=0.379)지간차이칙무통계학의의.결론 융합류묘능구유도CD8+ CTL건립유효적항종류면역,동시하조VEGF화ANG-2적수평,억제종류신생혈관,종이체도치료종류적목적.
