郑州大学学报(医学版)
鄭州大學學報(醫學版)
정주대학학보(의학판)
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERISTY(MEDICAL SCIENCES)
2012年
1期
16-20
,共5页
柴丹丹%李庆华%阎赟梦%毛丽红%李靓%朱立强%薛乐勋
柴丹丹%李慶華%閻赟夢%毛麗紅%李靚%硃立彊%薛樂勛
시단단%리경화%염빈몽%모려홍%리정%주립강%설악훈
S腺苷高半胱氨酸水解酶%酵母双杂交%诱饵载体%自激活%杜氏盐藻
S腺苷高半胱氨痠水解酶%酵母雙雜交%誘餌載體%自激活%杜氏鹽藻
S선감고반광안산수해매%효모쌍잡교%유이재체%자격활%두씨염조
目的:构建杜氏盐藻S腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHH)的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SAHH,并检测其对酵母细胞的毒性和自激活作用.方法:应用RT-PCR扩增杜氏盐藻的SAHH cDNA,测序分析后与酵母双杂交诱饵载体pGBKT7连接,构建诱饵载体pGBKT7-SAHH.用PEG/LiAc法将诱饵载体转入AH109和Y187酵母中,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母有无毒性和自激活作用.结果:成功构建了诱饵载体pGBKT7-SAHH并成功转化到酵母细胞AH109和Y187中,表达的融合蛋白对宿主酵母细胞无毒性.在AH109和Y187酵母细胞中诱饵载体均未激活报告基因HIS3和ADE2,但是激活了报告基因MEL1.结论:诱饵载体pGBKT7-SAHH可用酵母双杂交方法筛选与SAHH相互作用的蛋白.
目的:構建杜氏鹽藻S腺苷高半胱氨痠水解酶(SAHH)的酵母雙雜交誘餌載體pGBKT7-SAHH,併檢測其對酵母細胞的毒性和自激活作用.方法:應用RT-PCR擴增杜氏鹽藻的SAHH cDNA,測序分析後與酵母雙雜交誘餌載體pGBKT7連接,構建誘餌載體pGBKT7-SAHH.用PEG/LiAc法將誘餌載體轉入AH109和Y187酵母中,通過錶型篩選檢測誘餌蛋白對酵母有無毒性和自激活作用.結果:成功構建瞭誘餌載體pGBKT7-SAHH併成功轉化到酵母細胞AH109和Y187中,錶達的融閤蛋白對宿主酵母細胞無毒性.在AH109和Y187酵母細胞中誘餌載體均未激活報告基因HIS3和ADE2,但是激活瞭報告基因MEL1.結論:誘餌載體pGBKT7-SAHH可用酵母雙雜交方法篩選與SAHH相互作用的蛋白.
목적:구건두씨염조S선감고반광안산수해매(SAHH)적효모쌍잡교유이재체pGBKT7-SAHH,병검측기대효모세포적독성화자격활작용.방법:응용RT-PCR확증두씨염조적SAHH cDNA,측서분석후여효모쌍잡교유이재체pGBKT7련접,구건유이재체pGBKT7-SAHH.용PEG/LiAc법장유이재체전입AH109화Y187효모중,통과표형사선검측유이단백대효모유무독성화자격활작용.결과:성공구건료유이재체pGBKT7-SAHH병성공전화도효모세포AH109화Y187중,표체적융합단백대숙주효모세포무독성.재AH109화Y187효모세포중유이재체균미격활보고기인HIS3화ADE2,단시격활료보고기인MEL1.결론:유이재체pGBKT7-SAHH가용효모쌍잡교방법사선여SAHH상호작용적단백.
