中华肝脏病杂志
中華肝髒病雜誌
중화간장병잡지
CHINESE JOURNAL OF HEPATOLOGY
2007年
4期
294-297
,共4页
朱丽影%成军%马英骥%李用国%钟丽华%洪源
硃麗影%成軍%馬英驥%李用國%鐘麗華%洪源
주려영%성군%마영기%리용국%종려화%홍원
肝星状细胞%原癌基因蛋白质c-sis%抑制性消减杂交%基因克隆
肝星狀細胞%原癌基因蛋白質c-sis%抑製性消減雜交%基因剋隆
간성상세포%원암기인단백질c-sis%억제성소감잡교%기인극륭
目的 应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建血小板衍生生长因子(PDGF)-BB刺激的大鼠HSC上调基因的cDNA消减文库,从分子生物学角度阐明PDGF在肝纤维化中的作用机制.方法 以PDGF-BB刺激的HSC作为实验组,以未用PDGF-BB刺激的HSC作为对照组,分别收获细胞提取总mRNA,并逆转录为cDNA.经Rsa I酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR扩增.将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR扩增后进行测序及生物信息学分析.结果 成功构建了PDGF-BB刺激HSC差异表达基因的cDNA消减文库.文库扩增后得到102个阳性克隆,经菌落PCR分析,得到93个200～1000 bp的插入片段.挑取含有插入片段的31个克隆进行测序,通过生物信息学分析获得13种已知基因序列,主要包括电压依赖性阴离子通道、热休克蛋白质47、Ras家族基因RAN等蛋白质基因.结论 PDGF-BB作为最有效的促有丝分裂原在激活HSC过程中上调某些与细胞生长相关的蛋白质、参与细胞内代谢的蛋白质及分子伴侣蛋白质等基因的表达,这将为进一步阐明PDGF-BB刺激HSC介导肝纤维化的分子生物学机制提供理论依据.
目的 應用抑製性消減雜交(SSH)技術構建血小闆衍生生長因子(PDGF)-BB刺激的大鼠HSC上調基因的cDNA消減文庫,從分子生物學角度闡明PDGF在肝纖維化中的作用機製.方法 以PDGF-BB刺激的HSC作為實驗組,以未用PDGF-BB刺激的HSC作為對照組,分彆收穫細胞提取總mRNA,併逆轉錄為cDNA.經Rsa I酶切後將實驗組cDNA分成兩組,分彆與兩種不同的接頭銜接,再與對照組cDNA進行兩次消減雜交及兩次抑製性PCR擴增.將產物與pGEM-Teasy載體連接,構建cDNA消減文庫,併轉化大腸桿菌進行文庫擴增,隨機挑選剋隆經PCR擴增後進行測序及生物信息學分析.結果 成功構建瞭PDGF-BB刺激HSC差異錶達基因的cDNA消減文庫.文庫擴增後得到102箇暘性剋隆,經菌落PCR分析,得到93箇200～1000 bp的插入片段.挑取含有插入片段的31箇剋隆進行測序,通過生物信息學分析穫得13種已知基因序列,主要包括電壓依賴性陰離子通道、熱休剋蛋白質47、Ras傢族基因RAN等蛋白質基因.結論 PDGF-BB作為最有效的促有絲分裂原在激活HSC過程中上調某些與細胞生長相關的蛋白質、參與細胞內代謝的蛋白質及分子伴侶蛋白質等基因的錶達,這將為進一步闡明PDGF-BB刺激HSC介導肝纖維化的分子生物學機製提供理論依據.
목적 응용억제성소감잡교(SSH)기술구건혈소판연생생장인자(PDGF)-BB자격적대서HSC상조기인적cDNA소감문고,종분자생물학각도천명PDGF재간섬유화중적작용궤제.방법 이PDGF-BB자격적HSC작위실험조,이미용PDGF-BB자격적HSC작위대조조,분별수획세포제취총mRNA,병역전록위cDNA.경Rsa I매절후장실험조cDNA분성량조,분별여량충불동적접두함접,재여대조조cDNA진행량차소감잡교급량차억제성PCR확증.장산물여pGEM-Teasy재체련접,구건cDNA소감문고,병전화대장간균진행문고확증,수궤도선극륭경PCR확증후진행측서급생물신식학분석.결과 성공구건료PDGF-BB자격HSC차이표체기인적cDNA소감문고.문고확증후득도102개양성극륭,경균락PCR분석,득도93개200～1000 bp적삽입편단.도취함유삽입편단적31개극륭진행측서,통과생물신식학분석획득13충이지기인서렬,주요포괄전압의뢰성음리자통도、열휴극단백질47、Ras가족기인RAN등단백질기인.결론 PDGF-BB작위최유효적촉유사분렬원재격활HSC과정중상조모사여세포생장상관적단백질、삼여세포내대사적단백질급분자반려단백질등기인적표체,저장위진일보천명PDGF-BB자격HSC개도간섬유화적분자생물학궤제제공이론의거.
