中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2008年
1期
69-74
,共6页
李小鸥%阎媛%黄巍%杨渝珍%王宏伟
李小鷗%閻媛%黃巍%楊渝珍%王宏偉
리소구%염원%황외%양투진%왕굉위
肿瘤坏死因子α%肿瘤坏死因子α转换酶%前肽结构域%抑制剂
腫瘤壞死因子α%腫瘤壞死因子α轉換酶%前肽結構域%抑製劑
종류배사인자α%종류배사인자α전환매%전태결구역%억제제
目的 以脂多糖(LPS)刺激人单核细胞型淋巴瘤细胞株THP-1为模型,观察重组肿瘤坏死因子α转换酶(TACE)前肽结构域对催化TACE结构域的自身抑制作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段.方法 首先利用DNA重组技术分别构造含前肽结构域和催化结构域的重组载体:用PCR方法 扩增出TACE的胞外结构域(T1300)和前肽结构域(T591),并克隆至载体pET-28a(+)中,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的 蛋白,两者均为包涵体,变性复活后经Ni2+-NTA亲和层析柱对表达的重组蛋白进行纯化.对纯化后的蛋白进行Western blot分析.LPS分时相刺激THP-1细胞后,用细胞学技术观察纯化的T591在蛋白质水平上对TACE的表达和活性的影响.结果 TACE重组前肽蛋白能显著抑制TACE的活性,减少分泌型TNF-α(sTNF-α)分泌,抑制率达57%.结论 TACE重组前肽抑制了TACE的活性,降低了sTNF-α的分泌,为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法 .
目的 以脂多糖(LPS)刺激人單覈細胞型淋巴瘤細胞株THP-1為模型,觀察重組腫瘤壞死因子α轉換酶(TACE)前肽結構域對催化TACE結構域的自身抑製作用,為人工榦預炎癥過程提供依據和手段.方法 首先利用DNA重組技術分彆構造含前肽結構域和催化結構域的重組載體:用PCR方法 擴增齣TACE的胞外結構域(T1300)和前肽結構域(T591),併剋隆至載體pET-28a(+)中,轉化至大腸桿菌BL21,經IPTG誘導錶達齣帶有His-tag的目的 蛋白,兩者均為包涵體,變性複活後經Ni2+-NTA親和層析柱對錶達的重組蛋白進行純化.對純化後的蛋白進行Western blot分析.LPS分時相刺激THP-1細胞後,用細胞學技術觀察純化的T591在蛋白質水平上對TACE的錶達和活性的影響.結果 TACE重組前肽蛋白能顯著抑製TACE的活性,減少分泌型TNF-α(sTNF-α)分泌,抑製率達57%.結論 TACE重組前肽抑製瞭TACE的活性,降低瞭sTNF-α的分泌,為抗炎藥物的設計和改造提供瞭新的依據和方法 .
목적 이지다당(LPS)자격인단핵세포형림파류세포주THP-1위모형,관찰중조종류배사인자α전환매(TACE)전태결구역대최화TACE결구역적자신억제작용,위인공간예염증과정제공의거화수단.방법 수선이용DNA중조기술분별구조함전태결구역화최화결구역적중조재체:용PCR방법 확증출TACE적포외결구역(T1300)화전태결구역(T591),병극륭지재체pET-28a(+)중,전화지대장간균BL21,경IPTG유도표체출대유His-tag적목적 단백,량자균위포함체,변성복활후경Ni2+-NTA친화층석주대표체적중조단백진행순화.대순화후적단백진행Western blot분석.LPS분시상자격THP-1세포후,용세포학기술관찰순화적T591재단백질수평상대TACE적표체화활성적영향.결과 TACE중조전태단백능현저억제TACE적활성,감소분비형TNF-α(sTNF-α)분비,억제솔체57%.결론 TACE중조전태억제료TACE적활성,강저료sTNF-α적분비,위항염약물적설계화개조제공료신적의거화방법 .
