中国普外基础与临床杂志
中國普外基礎與臨床雜誌
중국보외기출여림상잡지
CHINESE JOURNAL OF BASES AND CLINICS IN GENERAL SURGERY
2006年
4期
424-426,430
,共4页
乔庆%窦科峰%陈勇%张静%李剑平%王映梅%毛海泉
喬慶%竇科峰%陳勇%張靜%李劍平%王映梅%毛海泉
교경%두과봉%진용%장정%리검평%왕영매%모해천
CD59%壳聚糖%纳米微粒%基因克隆%基因转染%免疫组织化学
CD59%殼聚糖%納米微粒%基因剋隆%基因轉染%免疫組織化學
CD59%각취당%납미미립%기인극륭%기인전염%면역조직화학
目的构建人CD59真核表达载体pSecTag2/HygroB-CD59,并利用壳聚糖(chitosan)组装成纳米微粒复合体,转染小鼠NIH3T3细胞.方法应用PCR方法,从CD59-pGEM-T Easy Vector克隆相关的DNA序列,插入到具有相应酶切位点的真核表达载体pSecTag2/HygroB中,构建pSecTag2/HygroB-CD59真核表达质粒,并进行酶切鉴定及序列测定.利用壳聚糖包裹质粒,转染小鼠NIH3T3细胞,并用抗CD59抗体对转染细胞进行免疫组织化学染色.结果 CD59基因大小为312 bp,与Genbank中记载的人CD59 cDNA序列结果完全一致.利用壳聚糖-CD59纳米微粒转染NIH3T3细胞24 h后,免疫组织化学染色显示转染细胞CD59呈弥漫性胞浆阳性.结论成功构建了人CD59真核表达载体并通过壳聚糖介导转染NIH3T3细胞,为进一步探讨及研究转基因肝脏奠定了基础.
目的構建人CD59真覈錶達載體pSecTag2/HygroB-CD59,併利用殼聚糖(chitosan)組裝成納米微粒複閤體,轉染小鼠NIH3T3細胞.方法應用PCR方法,從CD59-pGEM-T Easy Vector剋隆相關的DNA序列,插入到具有相應酶切位點的真覈錶達載體pSecTag2/HygroB中,構建pSecTag2/HygroB-CD59真覈錶達質粒,併進行酶切鑒定及序列測定.利用殼聚糖包裹質粒,轉染小鼠NIH3T3細胞,併用抗CD59抗體對轉染細胞進行免疫組織化學染色.結果 CD59基因大小為312 bp,與Genbank中記載的人CD59 cDNA序列結果完全一緻.利用殼聚糖-CD59納米微粒轉染NIH3T3細胞24 h後,免疫組織化學染色顯示轉染細胞CD59呈瀰漫性胞漿暘性.結論成功構建瞭人CD59真覈錶達載體併通過殼聚糖介導轉染NIH3T3細胞,為進一步探討及研究轉基因肝髒奠定瞭基礎.
목적구건인CD59진핵표체재체pSecTag2/HygroB-CD59,병이용각취당(chitosan)조장성납미미립복합체,전염소서NIH3T3세포.방법응용PCR방법,종CD59-pGEM-T Easy Vector극륭상관적DNA서렬,삽입도구유상응매절위점적진핵표체재체pSecTag2/HygroB중,구건pSecTag2/HygroB-CD59진핵표체질립,병진행매절감정급서렬측정.이용각취당포과질립,전염소서NIH3T3세포,병용항CD59항체대전염세포진행면역조직화학염색.결과 CD59기인대소위312 bp,여Genbank중기재적인CD59 cDNA서렬결과완전일치.이용각취당-CD59납미미립전염NIH3T3세포24 h후,면역조직화학염색현시전염세포CD59정미만성포장양성.결론성공구건료인CD59진핵표체재체병통과각취당개도전염NIH3T3세포,위진일보탐토급연구전기인간장전정료기출.
