北京林业大学学报
北京林業大學學報
북경임업대학학보
JOURNAL OF BEIJING FORESTRY UNIVERSITY
2006年
6期
103-108
,共6页
基因表达%核盘菌%arom基因%大肠杆菌
基因錶達%覈盤菌%arom基因%大腸桿菌
기인표체%핵반균%arom기인%대장간균
不含有内含子的核盘菌arom基因已经被扩增、测序.该基因编码五功能的AROM蛋白.为了大量获得核盘菌AROM蛋白的结构域之一5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS),将该菌arom基因编码脱氢奎尼酸合酶(DHQS)和EPSPS两结构域的DNA序列和只编码EPSPS结构域的DNA序列分别克隆入载体pGEX-4t-2和载体pET28b中,构建了4个表达载体pGEX-DE、pGEX-E、pET-DE和pET-E,并将其转入大肠杆菌DH5α、大肠杆菌BL21(DE3)或大肠杆菌JM109中表达.酶活测定和SDS-PAGE分析结果显示,上述编码序列在大肠杆菌细胞内获得了表达,含有表达载体pGEX-E、pET-DE和pET-E的大肠杆菌BL21(DE3)转化子具有EPSPS的催化活性,说明核盘菌arom基因的这些DNA片段可以被单独表达.核盘菌EPSPS异源表达系统的建立为该酶的抑制剂设计奠定了基础.
不含有內含子的覈盤菌arom基因已經被擴增、測序.該基因編碼五功能的AROM蛋白.為瞭大量穫得覈盤菌AROM蛋白的結構域之一5-烯醇丙酮酰莽草痠-3-燐痠閤酶(EPSPS),將該菌arom基因編碼脫氫奎尼痠閤酶(DHQS)和EPSPS兩結構域的DNA序列和隻編碼EPSPS結構域的DNA序列分彆剋隆入載體pGEX-4t-2和載體pET28b中,構建瞭4箇錶達載體pGEX-DE、pGEX-E、pET-DE和pET-E,併將其轉入大腸桿菌DH5α、大腸桿菌BL21(DE3)或大腸桿菌JM109中錶達.酶活測定和SDS-PAGE分析結果顯示,上述編碼序列在大腸桿菌細胞內穫得瞭錶達,含有錶達載體pGEX-E、pET-DE和pET-E的大腸桿菌BL21(DE3)轉化子具有EPSPS的催化活性,說明覈盤菌arom基因的這些DNA片段可以被單獨錶達.覈盤菌EPSPS異源錶達繫統的建立為該酶的抑製劑設計奠定瞭基礎.
불함유내함자적핵반균arom기인이경피확증、측서.해기인편마오공능적AROM단백.위료대량획득핵반균AROM단백적결구역지일5-희순병동선망초산-3-린산합매(EPSPS),장해균arom기인편마탈경규니산합매(DHQS)화EPSPS량결구역적DNA서렬화지편마EPSPS결구역적DNA서렬분별극륭입재체pGEX-4t-2화재체pET28b중,구건료4개표체재체pGEX-DE、pGEX-E、pET-DE화pET-E,병장기전입대장간균DH5α、대장간균BL21(DE3)혹대장간균JM109중표체.매활측정화SDS-PAGE분석결과현시,상술편마서렬재대장간균세포내획득료표체,함유표체재체pGEX-E、pET-DE화pET-E적대장간균BL21(DE3)전화자구유EPSPS적최화활성,설명핵반균arom기인적저사DNA편단가이피단독표체.핵반균EPSPS이원표체계통적건립위해매적억제제설계전정료기출.
