上海交通大学学报（农业科学版）
上海交通大學學報（農業科學版）
상해교통대학학보（농업과학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE)
2007年
5期
483-488
,共6页
刘俊平%庄金山%孙志%张建武%陶琦%袁世山
劉俊平%莊金山%孫誌%張建武%陶琦%袁世山
류준평%장금산%손지%장건무%도기%원세산
猪圆环病毒2型%TaqMan荧光PCR%检测
豬圓環病毒2型%TaqMan熒光PCR%檢測
저원배병독2형%TaqMan형광PCR%검측
针对猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2的序列设计两对特异性引物及TaqMan探针,以感PCV2的PK-15细胞培养上清的DNA提取物为模板,分别扩增499 bp和131 bp的片段,建立了检测PCV2的TaqMan荧光PCR方法.结果表明:TaqMan荧光PCR检测PCV2的最佳探针浓度为05 pmol·μL-1;TaqMan荧光PCR两步法操作快捷,扩增131 bp的引物PCF1101/PCR1232检测敏感性高(3.17×102拷贝·μL-1),重复性好.在诸多检测样品中,除检测到PCV2检测指标出现阳性外,猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV),日本乙型脑炎病毒(JEV),猪伪狂犬病毒(PRV),猪瘟病毒(CSFV)及PK-15细胞等检测指标均为阴性,表明特异性强;与普通PCR的检测结果(2/10)比较,本法的敏感性和对临床样品的阳性检出率(3/10)更高.上述研究表明,本方法快速、敏感、特异,具有很高的重复性,且可实时监测,能有效检测PCV2.
針對豬圓環病毒2型(PCV2)ORF2的序列設計兩對特異性引物及TaqMan探針,以感PCV2的PK-15細胞培養上清的DNA提取物為模闆,分彆擴增499 bp和131 bp的片段,建立瞭檢測PCV2的TaqMan熒光PCR方法.結果錶明:TaqMan熒光PCR檢測PCV2的最佳探針濃度為05 pmol·μL-1;TaqMan熒光PCR兩步法操作快捷,擴增131 bp的引物PCF1101/PCR1232檢測敏感性高(3.17×102拷貝·μL-1),重複性好.在諸多檢測樣品中,除檢測到PCV2檢測指標齣現暘性外,豬呼吸與繁殖障礙綜閤徵病毒(PRRSV),日本乙型腦炎病毒(JEV),豬偽狂犬病毒(PRV),豬瘟病毒(CSFV)及PK-15細胞等檢測指標均為陰性,錶明特異性彊;與普通PCR的檢測結果(2/10)比較,本法的敏感性和對臨床樣品的暘性檢齣率(3/10)更高.上述研究錶明,本方法快速、敏感、特異,具有很高的重複性,且可實時鑑測,能有效檢測PCV2.
침대저원배병독2형(PCV2)ORF2적서렬설계량대특이성인물급TaqMan탐침,이감PCV2적PK-15세포배양상청적DNA제취물위모판,분별확증499 bp화131 bp적편단,건립료검측PCV2적TaqMan형광PCR방법.결과표명:TaqMan형광PCR검측PCV2적최가탐침농도위05 pmol·μL-1;TaqMan형광PCR량보법조작쾌첩,확증131 bp적인물PCF1101/PCR1232검측민감성고(3.17×102고패·μL-1),중복성호.재제다검측양품중,제검측도PCV2검측지표출현양성외,저호흡여번식장애종합정병독(PRRSV),일본을형뇌염병독(JEV),저위광견병독(PRV),저온병독(CSFV)급PK-15세포등검측지표균위음성,표명특이성강;여보통PCR적검측결과(2/10)비교,본법적민감성화대림상양품적양성검출솔(3/10)경고.상술연구표명,본방법쾌속、민감、특이,구유흔고적중복성,차가실시감측,능유효검측PCV2.
