世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2008年
21期
2395-2398
,共4页
程张军%Xin Shi%汤永辉%Nai-Rong Gao
程張軍%Xin Shi%湯永輝%Nai-Rong Gao
정장군%Xin Shi%탕영휘%Nai-Rong Gao
BRAF%胰腺癌%逆转录聚合酶链式反应%Western blot%克隆%真核表达
BRAF%胰腺癌%逆轉錄聚閤酶鏈式反應%Western blot%剋隆%真覈錶達
BRAF%이선암%역전록취합매련식반응%Western blot%극륭%진핵표체
目的:构建BRAF野生型和V600E突变型真核表达载体;转染并筛选稳定表达BRAF的胰腺癌细胞株,为探讨BRAF V600E突变在胰腺癌发生发展中的作用提供合适的细胞模型.方法:将BRAF野生型及V600E突变型cDNA克隆于真核表达载体pCMV-Myc中,构建pCMV-Myc-BRAFW)及pCMV-Myc-BRAFV600E重组质粒,酶切鉴定、测序证实序列正确后,利用脂质体将重组质粒转染胰腺癌细胞Panc-1,经G418培养筛选获得抗性细胞克隆,用RT-PCR和Western blot鉴定野生型和V600E突变型BRAF基因在Panc-1细胞中的表达.结果.酶切鉴定和序列分析证实,重组克隆pCMV-Myc—和pCMV-Myc—BRAFV600E序列正确,RT-PCR和Western blot结果显示G418筛选获得的转基因Panc-1细胞稳定表达BRAF和BRAF V600E.结论:成功构建了pCMV-Myc-BRAFW和pCMV-Myc-BRAFV600E真核表达载体,建立了稳定表达BRAF和BRAF V600E的胰腺癌细胞株.稳定表达BRAF和BRAF V600E的胰腺癌细胞株.稳定表达BRAF和BRAF V600E的胰腺癌细胞株.
目的:構建BRAF野生型和V600E突變型真覈錶達載體;轉染併篩選穩定錶達BRAF的胰腺癌細胞株,為探討BRAF V600E突變在胰腺癌髮生髮展中的作用提供閤適的細胞模型.方法:將BRAF野生型及V600E突變型cDNA剋隆于真覈錶達載體pCMV-Myc中,構建pCMV-Myc-BRAFW)及pCMV-Myc-BRAFV600E重組質粒,酶切鑒定、測序證實序列正確後,利用脂質體將重組質粒轉染胰腺癌細胞Panc-1,經G418培養篩選穫得抗性細胞剋隆,用RT-PCR和Western blot鑒定野生型和V600E突變型BRAF基因在Panc-1細胞中的錶達.結果.酶切鑒定和序列分析證實,重組剋隆pCMV-Myc—和pCMV-Myc—BRAFV600E序列正確,RT-PCR和Western blot結果顯示G418篩選穫得的轉基因Panc-1細胞穩定錶達BRAF和BRAF V600E.結論:成功構建瞭pCMV-Myc-BRAFW和pCMV-Myc-BRAFV600E真覈錶達載體,建立瞭穩定錶達BRAF和BRAF V600E的胰腺癌細胞株.穩定錶達BRAF和BRAF V600E的胰腺癌細胞株.穩定錶達BRAF和BRAF V600E的胰腺癌細胞株.
목적:구건BRAF야생형화V600E돌변형진핵표체재체;전염병사선은정표체BRAF적이선암세포주,위탐토BRAF V600E돌변재이선암발생발전중적작용제공합괄적세포모형.방법:장BRAF야생형급V600E돌변형cDNA극륭우진핵표체재체pCMV-Myc중,구건pCMV-Myc-BRAFW)급pCMV-Myc-BRAFV600E중조질립,매절감정、측서증실서렬정학후,이용지질체장중조질립전염이선암세포Panc-1,경G418배양사선획득항성세포극륭,용RT-PCR화Western blot감정야생형화V600E돌변형BRAF기인재Panc-1세포중적표체.결과.매절감정화서렬분석증실,중조극륭pCMV-Myc—화pCMV-Myc—BRAFV600E서렬정학,RT-PCR화Western blot결과현시G418사선획득적전기인Panc-1세포은정표체BRAF화BRAF V600E.결론:성공구건료pCMV-Myc-BRAFW화pCMV-Myc-BRAFV600E진핵표체재체,건립료은정표체BRAF화BRAF V600E적이선암세포주.은정표체BRAF화BRAF V600E적이선암세포주.은정표체BRAF화BRAF V600E적이선암세포주.
