江苏大学学报(医学版)
江囌大學學報(醫學版)
강소대학학보(의학판)
ACADEMIC JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY(MEDICINE)
2010年
4期
282-285,291
,共5页
韩军%邵世和%谢立苹%黄世腾%田树伟%黄河
韓軍%邵世和%謝立蘋%黃世騰%田樹偉%黃河
한군%소세화%사립평%황세등%전수위%황하
幽门螺杆菌%Cag致病岛%CagI%多克隆抗体
幽門螺桿菌%Cag緻病島%CagI%多剋隆抗體
유문라간균%Cag치병도%CagI%다극륭항체
目的: 构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)Cag致病岛(Cag-pathogenicity island,Cag-PAI)编码的hp0540基因的原核表达系统,并制备其多克隆抗体.方法: 应用PCR技术从Hp11637基因组DNA中扩增hp0540基因片段,克隆至pMD18-2T载体后,进行序列测定,并对其序列进行生物信息学分析;构建pET-28a-hp0540原核表达载体,转化表达宿主菌BL21DE3;经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE法鉴定目的蛋白的表达,并以Ni2+-NTA柱分离纯化目的蛋白;将纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并测定抗体效价.结果: 成功克隆了hp0540基因,全长1 086 bp,编码361个氨基酸,与基因库公布的其他Hp菌株基因序列的核苷酸同源性为98%.工程菌诱导后SDS-PAGE显示新生表达蛋白带,相对分子质量约为39 000,经Ni2+-NTA柱纯化后可获得重组蛋白,重组蛋白免疫新西兰大白兔后获得效价为1∶ 160 000的多克隆抗体.结论: 成功构建了hp0540基因的原核表达系统并制备了其多克隆抗体,为研究该基因的功能奠定了基础.
目的: 構建幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)Cag緻病島(Cag-pathogenicity island,Cag-PAI)編碼的hp0540基因的原覈錶達繫統,併製備其多剋隆抗體.方法: 應用PCR技術從Hp11637基因組DNA中擴增hp0540基因片段,剋隆至pMD18-2T載體後,進行序列測定,併對其序列進行生物信息學分析;構建pET-28a-hp0540原覈錶達載體,轉化錶達宿主菌BL21DE3;經IPTG誘導錶達後,SDS-PAGE法鑒定目的蛋白的錶達,併以Ni2+-NTA柱分離純化目的蛋白;將純化蛋白免疫新西蘭大白兔製備多剋隆抗體併測定抗體效價.結果: 成功剋隆瞭hp0540基因,全長1 086 bp,編碼361箇氨基痠,與基因庫公佈的其他Hp菌株基因序列的覈苷痠同源性為98%.工程菌誘導後SDS-PAGE顯示新生錶達蛋白帶,相對分子質量約為39 000,經Ni2+-NTA柱純化後可穫得重組蛋白,重組蛋白免疫新西蘭大白兔後穫得效價為1∶ 160 000的多剋隆抗體.結論: 成功構建瞭hp0540基因的原覈錶達繫統併製備瞭其多剋隆抗體,為研究該基因的功能奠定瞭基礎.
목적: 구건유문라간균(Helicobacter pylori,Hp)Cag치병도(Cag-pathogenicity island,Cag-PAI)편마적hp0540기인적원핵표체계통,병제비기다극륭항체.방법: 응용PCR기술종Hp11637기인조DNA중확증hp0540기인편단,극륭지pMD18-2T재체후,진행서렬측정,병대기서렬진행생물신식학분석;구건pET-28a-hp0540원핵표체재체,전화표체숙주균BL21DE3;경IPTG유도표체후,SDS-PAGE법감정목적단백적표체,병이Ni2+-NTA주분리순화목적단백;장순화단백면역신서란대백토제비다극륭항체병측정항체효개.결과: 성공극륭료hp0540기인,전장1 086 bp,편마361개안기산,여기인고공포적기타Hp균주기인서렬적핵감산동원성위98%.공정균유도후SDS-PAGE현시신생표체단백대,상대분자질량약위39 000,경Ni2+-NTA주순화후가획득중조단백,중조단백면역신서란대백토후획득효개위1∶ 160 000적다극륭항체.결론: 성공구건료hp0540기인적원핵표체계통병제비료기다극륭항체,위연구해기인적공능전정료기출.
