上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2011年
5期
538-542
,共5页
胡景超%束蓉%宋忠臣%程岚
鬍景超%束蓉%宋忠臣%程嵐
호경초%속용%송충신%정람
骨髓基质细胞%重组慢病毒载体%釉原蛋白%基因转导
骨髓基質細胞%重組慢病毒載體%釉原蛋白%基因轉導
골수기질세포%중조만병독재체%유원단백%기인전도
目的 观察慢病毒介导的人釉原蛋白(hAm)基因转导对人骨髓基质细胞(hBMSCs)增殖及细胞成骨分化标志物碱性磷酸酶(ALP)合成的影响.方法 采用RT-PCR技术获取hAm编码基因,扩增产物与携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体质粒(FUGW)连接构建重组慢病毒载体质粒FUAmW,以聚乙烯亚胺(PEI)法三质粒共转染293T细胞组装获取慢病毒,并感染hBMSCs(目的基因转导组);以感染FUGW和未感染病毒的hBMSCs分别作为对照基因转导组和空白对照组.流式细胞仪测定慢病毒感染效率,RT-PCR鉴定细胞hAm表达;MTT比色法检测细胞增殖;慢病毒感染后第7天,倒置相差显微镜观察各组细胞ALP染色情况;感染后第4、7、10天,采用RT-PCR技术检测各组hBMSCs内ALP mRNA表达.结果 目的基因转导组细胞FUAmW的感染效率达40.29%,RT-PCR检测到540 bp的目的基因产物条带;细胞增殖水平显著高于对照基因转导组和空白对照组(P＜0.05);慢病毒感染后第7天,目的基因转导组ALP染色阳性细胞数量明显少于对照基因转导组和空白对照组;感染后第4、7、10天,目的基因转导组细胞ALP mRNA表达显著低于对照基因转导组和空白对照组.结论 导入外源性Am基因能刺激hBMSCs增殖,但细胞内ALP mRNA表达下调.
目的 觀察慢病毒介導的人釉原蛋白(hAm)基因轉導對人骨髓基質細胞(hBMSCs)增殖及細胞成骨分化標誌物堿性燐痠酶(ALP)閤成的影響.方法 採用RT-PCR技術穫取hAm編碼基因,擴增產物與攜帶綠色熒光蛋白(GFP)的慢病毒載體質粒(FUGW)連接構建重組慢病毒載體質粒FUAmW,以聚乙烯亞胺(PEI)法三質粒共轉染293T細胞組裝穫取慢病毒,併感染hBMSCs(目的基因轉導組);以感染FUGW和未感染病毒的hBMSCs分彆作為對照基因轉導組和空白對照組.流式細胞儀測定慢病毒感染效率,RT-PCR鑒定細胞hAm錶達;MTT比色法檢測細胞增殖;慢病毒感染後第7天,倒置相差顯微鏡觀察各組細胞ALP染色情況;感染後第4、7、10天,採用RT-PCR技術檢測各組hBMSCs內ALP mRNA錶達.結果 目的基因轉導組細胞FUAmW的感染效率達40.29%,RT-PCR檢測到540 bp的目的基因產物條帶;細胞增殖水平顯著高于對照基因轉導組和空白對照組(P＜0.05);慢病毒感染後第7天,目的基因轉導組ALP染色暘性細胞數量明顯少于對照基因轉導組和空白對照組;感染後第4、7、10天,目的基因轉導組細胞ALP mRNA錶達顯著低于對照基因轉導組和空白對照組.結論 導入外源性Am基因能刺激hBMSCs增殖,但細胞內ALP mRNA錶達下調.
목적 관찰만병독개도적인유원단백(hAm)기인전도대인골수기질세포(hBMSCs)증식급세포성골분화표지물감성린산매(ALP)합성적영향.방법 채용RT-PCR기술획취hAm편마기인,확증산물여휴대록색형광단백(GFP)적만병독재체질립(FUGW)련접구건중조만병독재체질립FUAmW,이취을희아알(PEI)법삼질립공전염293T세포조장획취만병독,병감염hBMSCs(목적기인전도조);이감염FUGW화미감염병독적hBMSCs분별작위대조기인전도조화공백대조조.류식세포의측정만병독감염효솔,RT-PCR감정세포hAm표체;MTT비색법검측세포증식;만병독감염후제7천,도치상차현미경관찰각조세포ALP염색정황;감염후제4、7、10천,채용RT-PCR기술검측각조hBMSCs내ALP mRNA표체.결과 목적기인전도조세포FUAmW적감염효솔체40.29%,RT-PCR검측도540 bp적목적기인산물조대;세포증식수평현저고우대조기인전도조화공백대조조(P＜0.05);만병독감염후제7천,목적기인전도조ALP염색양성세포수량명현소우대조기인전도조화공백대조조;감염후제4、7、10천,목적기인전도조세포ALP mRNA표체현저저우대조기인전도조화공백대조조.결론 도입외원성Am기인능자격hBMSCs증식,단세포내ALP mRNA표체하조.
