中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2011年
4期
91-94
,共4页
IL-3基因%GM-CSF基因%Hly基因%cDNA%克隆%测序
IL-3基因%GM-CSF基因%Hly基因%cDNA%剋隆%測序
IL-3기인%GM-CSF기인%Hly기인%cDNA%극륭%측서
试验利用PCR技术扩增并获得了人IL-3、GM-CSF和人溶菌酶(human lysozyme,Hly)基因组基因编码区序列,人IL-3和GM-CSF基因PCR产物与pMD19-T连接、Hly基因PCR产物同pEASY-Blunt载体连接,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,蓝白斑筛选后经PCR及酶切鉴定,选取测序正确的克隆连接到pIRESneo载体中构建相关真核表达载体,分别用这些基因的表达载体转染PK15细胞,48 h后提取转染细胞的总RNA,并采用RT-PCR方法获得了人IL-3、GM-CSF和Hly基因的cDNA,结果发现.所获得的cDNA序列同NCBI登录的序列完全同源.
試驗利用PCR技術擴增併穫得瞭人IL-3、GM-CSF和人溶菌酶(human lysozyme,Hly)基因組基因編碼區序列,人IL-3和GM-CSF基因PCR產物與pMD19-T連接、Hly基因PCR產物同pEASY-Blunt載體連接,轉化大腸桿菌JM109感受態細胞,藍白斑篩選後經PCR及酶切鑒定,選取測序正確的剋隆連接到pIRESneo載體中構建相關真覈錶達載體,分彆用這些基因的錶達載體轉染PK15細胞,48 h後提取轉染細胞的總RNA,併採用RT-PCR方法穫得瞭人IL-3、GM-CSF和Hly基因的cDNA,結果髮現.所穫得的cDNA序列同NCBI登錄的序列完全同源.
시험이용PCR기술확증병획득료인IL-3、GM-CSF화인용균매(human lysozyme,Hly)기인조기인편마구서렬,인IL-3화GM-CSF기인PCR산물여pMD19-T련접、Hly기인PCR산물동pEASY-Blunt재체련접,전화대장간균JM109감수태세포,람백반사선후경PCR급매절감정,선취측서정학적극륭련접도pIRESneo재체중구건상관진핵표체재체,분별용저사기인적표체재체전염PK15세포,48 h후제취전염세포적총RNA,병채용RT-PCR방법획득료인IL-3、GM-CSF화Hly기인적cDNA,결과발현.소획득적cDNA서렬동NCBI등록적서렬완전동원.
