解剖学研究
解剖學研究
해부학연구
ANATOMY RESEARCH
2011年
2期
105-109
,共5页
陈易斐%黄莉钧%李磊%戴智育%程锐%杨霞%高国全
陳易斐%黃莉鈞%李磊%戴智育%程銳%楊霞%高國全
진역비%황리균%리뢰%대지육%정예%양하%고국전
KBP重组蛋白%多克隆抗体制备%抗体评价
KBP重組蛋白%多剋隆抗體製備%抗體評價
KBP중조단백%다극륭항체제비%항체평개
目的 激肽释放酶结合蛋白(Kallikrein-binding protein,KBP)具有抑制血管新生的高活性,但目前尚无KBP的特异性抗体,限制其进一步研究.本研究拟制备高灵敏度和高特异性的KBP抗体并对其进行初步评估.方法 构建含大鼠源性KBP序列的pET-28a重组载体的大肠杆菌BL21(DE3),在此基础上,扩增表达菌,经异丙基B.D一硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni-NTA色谱柱亲和层析纯化获得KBP重组蛋白.利用SDS-PAGE和Western blot方法对KBP进行鉴定.以纯化产物为抗原免疫新西兰大白兔,获得兔抗KBP血清,亲和纯化获得多克隆抗体.应用Elisa和Western-blot方法检测纯化抗体的效价和特异性.结果 KBP融合蛋白得到高表达,且纯度大于85%.用该融合蛋白免疫大白兔后得到的抗KBP抗体,效价达1∶512 000,并特异性识别大鼠和人组织中天然的KBP蛋白.结论以纯化的KBP重组蛋白为抗原,获得KBP多克隆抗体,具有较好的效价和特异性,为KBP功能和作用机制的深入研究提供了必要的工具.
目的 激肽釋放酶結閤蛋白(Kallikrein-binding protein,KBP)具有抑製血管新生的高活性,但目前尚無KBP的特異性抗體,限製其進一步研究.本研究擬製備高靈敏度和高特異性的KBP抗體併對其進行初步評估.方法 構建含大鼠源性KBP序列的pET-28a重組載體的大腸桿菌BL21(DE3),在此基礎上,擴增錶達菌,經異丙基B.D一硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,Ni-NTA色譜柱親和層析純化穫得KBP重組蛋白.利用SDS-PAGE和Western blot方法對KBP進行鑒定.以純化產物為抗原免疫新西蘭大白兔,穫得兔抗KBP血清,親和純化穫得多剋隆抗體.應用Elisa和Western-blot方法檢測純化抗體的效價和特異性.結果 KBP融閤蛋白得到高錶達,且純度大于85%.用該融閤蛋白免疫大白兔後得到的抗KBP抗體,效價達1∶512 000,併特異性識彆大鼠和人組織中天然的KBP蛋白.結論以純化的KBP重組蛋白為抗原,穫得KBP多剋隆抗體,具有較好的效價和特異性,為KBP功能和作用機製的深入研究提供瞭必要的工具.
목적 격태석방매결합단백(Kallikrein-binding protein,KBP)구유억제혈관신생적고활성,단목전상무KBP적특이성항체,한제기진일보연구.본연구의제비고령민도화고특이성적KBP항체병대기진행초보평고.방법 구건함대서원성KBP서렬적pET-28a중조재체적대장간균BL21(DE3),재차기출상,확증표체균,경이병기B.D일류대반유당감(IPTG)유도표체,Ni-NTA색보주친화층석순화획득KBP중조단백.이용SDS-PAGE화Western blot방법대KBP진행감정.이순화산물위항원면역신서란대백토,획득토항KBP혈청,친화순화획득다극륭항체.응용Elisa화Western-blot방법검측순화항체적효개화특이성.결과 KBP융합단백득도고표체,차순도대우85%.용해융합단백면역대백토후득도적항KBP항체,효개체1∶512 000,병특이성식별대서화인조직중천연적KBP단백.결론이순화적KBP중조단백위항원,획득KBP다극륭항체,구유교호적효개화특이성,위KBP공능화작용궤제적심입연구제공료필요적공구.
