CAJ | 학술논문

[目的]研究蜡梅花香基因SAMT cDNA的克隆及表达.[方法]以蜡梅花瓣总RNA为模板进行RT-PCR,扩增得到与预期大小相同的PCR产物带,回收RT-PCR产物,将其与PMD18-T载体进行T-A克隆连接并导入大肠杆菌DH5α,经菌落PCR和双酶切鉴定,筛选带有目的基因的重组质粒并进行测序.[结果]测序证实成功克隆得到蜡梅花香基因SAMT cDNA的ORF片段,其长度为1 196 bp,编码380个氨基酸残基,与已报导的蜡梅SAMT(ABU88887)的同源性为99.2％.将SAMT基因亚克隆到原核表达载体PGEX4T-1中获得重组菌种命名为PGSAMT,用0.01 mol/L的IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE分析,SAMT的融合表达蛋白分子量约为66kDa,与预期的26kDa的GST带和42.3 kDa的蜡梅SAMT基因编码蛋白构成的融合蛋白大小接近.[结论]该研究成功克隆并表达蜡梅花香基因SAMT.
[목적]연구사매화향기인SAMT cDNA적극륭급표체.[방법]이사매화판총RNA위모판진행RT-PCR,확증득도여예기대소상동적PCR산물대,회수RT-PCR산물,장기여PMD18-T재체진행T-A극륭련접병도입대장간균DH5α,경균락PCR화쌍매절감정,사선대유목적기인적중조질립병진행측서.[결과]측서증실성공극륭득도사매화향기인SAMT cDNA적ORF편단,기장도위1 196 bp,편마380개안기산잔기,여이보도적사매SAMT(ABU88887)적동원성위99.2％.장SAMT기인아극륭도원핵표체재체PGEX4T-1중획득중조균충명명위PGSAMT,용0.01 mol/L적IPTG진행유도표체,경SDS-PAGE분석,SAMT적융합표체단백분자량약위66kDa,여예기적26kDa적GST대화42.3 kDa적사매SAMT기인편마단백구성적융합단백대소접근.[결론]해연구성공극륭병표체사매화향기인SAMT.