CAJ | 학술논문

目的:分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞并观察其生物学特性.方法:实验于2004-05/2006-04在武装警察部队医学院细胞生物学实验室进行.在无菌条件下分离大鼠胫骨、股骨,用预冷磷酸盐缓冲液冲出骨髓,经Percoll梯度分离方法获得骨髓单个核细胞,接种含体积分数为0.10胎牛血清的IMDM培养基中.对单个核细胞行贴壁培养后,通过倒置光显微镜和透射电子显微镜进行细胞形态学观察,流式细胞术进行细胞周期分析,细胞计数法测定细胞生长曲线,免疫细胞化学染色显示c-kit表达.结果:①倒置光显微镜下观察采用Percoll(1.073 g/mL)分离的骨髓间充质干细胞大小较为均匀,基本上呈梭形或星形的上皮样细胞,传代培养后的细胞体积增大,成纤维样细胞逐渐增多.②透射电子显微镜下观察骨髓间充质干细胞的核质比例较大,核仁大而明显,细胞表面有微绒毛,胞浆内可见核糖体和线粒体,其他细胞器较少,表现出未分化细胞的特征.③细胞生长曲线测定表明接种后第4天细胞进入指数增生期,至第7天进入平台期.④流式细胞术证明G2+S期细胞为11.8%.⑤体积较大的多角形细胞为c-kit阳性,体积较小的成纤维样细胞为阴性细胞,阳性颗粒主要分布在细胞膜和细胞质,细胞核未见表达,阳性细胞比率为55.3%.结论:成功地建立了一种分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的方法,获得的细胞生长稳定,增殖活跃,可作为组织工程的种子细胞.
목적:분리화배양대서골수간충질간세포병관찰기생물학특성.방법:실험우2004-05/2006-04재무장경찰부대의학원세포생물학실험실진행.재무균조건하분리대서경골、고골,용예랭린산염완충액충출골수,경Percoll제도분리방법획득골수단개핵세포,접충함체적분수위0.10태우혈청적IMDM배양기중.대단개핵세포행첩벽배양후,통과도치광현미경화투사전자현미경진행세포형태학관찰,류식세포술진행세포주기분석,세포계수법측정세포생장곡선,면역세포화학염색현시c-kit표체.결과:①도치광현미경하관찰채용Percoll(1.073 g/mL)분리적골수간충질간세포대소교위균균,기본상정사형혹성형적상피양세포,전대배양후적세포체적증대,성섬유양세포축점증다.②투사전자현미경하관찰골수간충질간세포적핵질비례교대,핵인대이명현,세포표면유미융모,포장내가견핵당체화선립체,기타세포기교소,표현출미분화세포적특정.③세포생장곡선측정표명접충후제4천세포진입지수증생기,지제7천진입평태기.④류식세포술증명G2+S기세포위11.8%.⑤체적교대적다각형세포위c-kit양성,체적교소적성섬유양세포위음성세포,양성과립주요분포재세포막화세포질,세포핵미견표체,양성세포비솔위55.3%.결론:성공지건립료일충분리배양대서골수간충질간세포적방법,획득적세포생장은정,증식활약,가작위조직공정적충자세포.