山东大学学报（医学版）
山東大學學報（醫學版）
산동대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2008年
4期
374-378
,共5页
王爱华%马立宪%江渊%邵丽华%王刚%陈丰哲%王旭平
王愛華%馬立憲%江淵%邵麗華%王剛%陳豐哲%王旭平
왕애화%마립헌%강연%소려화%왕강%진봉철%왕욱평
HepG2细胞%HGPRT突变%人原代肝细胞%细胞融合%杂交细胞
HepG2細胞%HGPRT突變%人原代肝細胞%細胞融閤%雜交細胞
HepG2세포%HGPRT돌변%인원대간세포%세포융합%잡교세포
目的 方法诱导HepG2细胞产生HGPRT基因突变,将筛选出的HGPRT阴性的HepG2细胞与携带HBV的人原代肝细胞进行融合得杂交细胞,用HAT培养基筛选出异核体杂交细胞,再利用有限稀释法进行克隆,通过核型分析方法鉴定所得细胞.对所得杂交细胞及培养上清液进行HBV DNA和HBsAg、HBeAg的检测.实验同时,用未杂交的HepG2和人原代肝细胞作对照.结果 经筛选后,有一杂交细胞株(HepCHLine3)克隆成功.HepCHLine3在形态学上与HGPRT-HepG2细胞相似,能体外传代培养,染色体核型分析示HepCHLine3杂交细胞染色体众数为99条,证明为融合细胞株,含所有来自HepG2和人原代肝细胞的基因数.传代培养的HepCHLine3和其培养上清液用巢式PCR分别可检测到HBV DNA,培养上清液内检测到HBsAg和HBeAg.对照组的HepG2和人原代肝细胞相应结果为阴性.提示该细胞携带并分泌HBV DNA.结论 该杂交细胞兼具HepG2细胞体外传代和人原代肝细胞对HBV易感的特性,是一新型杂交细胞系,为进一步建立新型HBV感染细胞模型奠定了基础.
目的 方法誘導HepG2細胞產生HGPRT基因突變,將篩選齣的HGPRT陰性的HepG2細胞與攜帶HBV的人原代肝細胞進行融閤得雜交細胞,用HAT培養基篩選齣異覈體雜交細胞,再利用有限稀釋法進行剋隆,通過覈型分析方法鑒定所得細胞.對所得雜交細胞及培養上清液進行HBV DNA和HBsAg、HBeAg的檢測.實驗同時,用未雜交的HepG2和人原代肝細胞作對照.結果 經篩選後,有一雜交細胞株(HepCHLine3)剋隆成功.HepCHLine3在形態學上與HGPRT-HepG2細胞相似,能體外傳代培養,染色體覈型分析示HepCHLine3雜交細胞染色體衆數為99條,證明為融閤細胞株,含所有來自HepG2和人原代肝細胞的基因數.傳代培養的HepCHLine3和其培養上清液用巢式PCR分彆可檢測到HBV DNA,培養上清液內檢測到HBsAg和HBeAg.對照組的HepG2和人原代肝細胞相應結果為陰性.提示該細胞攜帶併分泌HBV DNA.結論 該雜交細胞兼具HepG2細胞體外傳代和人原代肝細胞對HBV易感的特性,是一新型雜交細胞繫,為進一步建立新型HBV感染細胞模型奠定瞭基礎.
목적 방법유도HepG2세포산생HGPRT기인돌변,장사선출적HGPRT음성적HepG2세포여휴대HBV적인원대간세포진행융합득잡교세포,용HAT배양기사선출이핵체잡교세포,재이용유한희석법진행극륭,통과핵형분석방법감정소득세포.대소득잡교세포급배양상청액진행HBV DNA화HBsAg、HBeAg적검측.실험동시,용미잡교적HepG2화인원대간세포작대조.결과 경사선후,유일잡교세포주(HepCHLine3)극륭성공.HepCHLine3재형태학상여HGPRT-HepG2세포상사,능체외전대배양,염색체핵형분석시HepCHLine3잡교세포염색체음수위99조,증명위융합세포주,함소유래자HepG2화인원대간세포적기인수.전대배양적HepCHLine3화기배양상청액용소식PCR분별가검측도HBV DNA,배양상청액내검측도HBsAg화HBeAg.대조조적HepG2화인원대간세포상응결과위음성.제시해세포휴대병분비HBV DNA.결론 해잡교세포겸구HepG2세포체외전대화인원대간세포대HBV역감적특성,시일신형잡교세포계,위진일보건립신형HBV감염세포모형전정료기출.
